Adeno-assosioitunut virus

adeno-assosioitunut virus

Adenoihin liittyvät virukset
tieteellinen luokittelu
Ryhmä:Virukset [1]Valtakunta:MonodnaviriaKuningaskunta:ShotokuviraeTyyppi:cossaviricotaLuokka:QuintoviricetesTilaus:PiccoviralesPerhe:ParvoviruksetAlaperhe:ParvovirinaeSuku:DependoparvovirusNäytä:adeno-assosioitunut virus
Kansainvälinen tieteellinen nimi
Adenoon liittyvä dependoparvovirus A
Synonyymit
  • Adeno-assosioitunut virus 1 [2]
  • Adeno-assosioitunut virus-1 [2] [3]
  • Adeno-assosioitunut virus-2 [3]
  • Adeno-assosioitunut virus-3 [3]
  • Adeno-assosioitunut virus-4 [3]
Baltimore Group
II: ssDNA-virukset

Adeno-assosioitunut virus ( eng.  Adeno-associated dependoparvovirus A , AAV) on pieni virus , joka infektoi soluja ihmisissä ja joissakin muissa kädellisissä . Adeno-assosioitunut virus ei näytä aiheuttavan sairauksia ihmisissä ja siksi se saa aikaan heikon immuunivasteen.

Adenoon liittyvä virus voi infektoida jakautuvia ja jakautumattomia soluja ja integroida genominsa isäntägenomiin. Nämä ominaisuudet tekevät AAV:sta erityisen houkuttelevan ehdokkaan virusvektorien suunnittelussa geeniterapiaa varten [ 4] .

Adeno-assosioitunut virus kuuluu parvovirusperheen ( Parvoviridae ) Dependoparvovirus - sukuun . Virus on pieni (20 nm), sillä ei ole lipidivaippaa, eikä se koodaa omia replikaatioentsyymejä .

Historia

Vuonna 1965 Robert Atchison julkaisi paperin, jossa kuvattiin uusi virus nimeltä adeno-assosioitunut virus [5] . Viruspartikkeleita on havaittu elektronimikroskopialla apinan adenovirusvalmisteista , jotka on siirretty useita kertoja primaarisiin rhesusapinan munuaissoluviljelmiin . Atchison-ryhmä erotti uuden viruksen 24 nm:n hiukkaset suuremmista 80 nm:n adenoviruspartikkeleista ultrasuodatuksella [6] .

Eristyksen jälkeen osoitettiin, että osittain puhdistetut adeno-assosioituneet virusvirionit eivät voi replikoitua itsestään , mutta voivat replikoitua ja levitä adenoviruksella infektoituneissa viljelmissä . Siten adeno-assosioitunut virus osoittautui vialliseksi seuravirukseksi, joka tarvitsee apuviruksen täydelliseen replikaatioon. Koska adeno-assosioitunut virus ei koodaa omaa DNA-polymeraasiaan , se vaatii auttajaviruksen, yleensä adenoviruksen, replikoituakseen [7] .

Heinäkuussa 2013 suvun tarkistuksen seurauksena 4 lähisukulaista lajia yhdistettiin yhdeksi, jolloin suvun nimi muutettiin Dependoparvovirukseksi ja lajin nimi Adeno-assosioituneeksi dependoparvovirukseksi A [3] .

Geeniterapian vektori

Edut ja haitat

Villityypin adeno-assosioituneella viruksella on joitain etuja geeniterapiassa . Yksi tärkeimmistä eduista on, että tämä virus ei ole patogeeninen . Adeno-assosioitunut virus voi infektoida jakautumattomia soluja ja integroitua isäntägenomiin tietyissä kohdissa (AAVS1) yhdeksännentoista kromosomissa [8] .

Tämä ominaisuus tekee adeno-assosioituneesta viruksesta ennustettavamman kuin retrovirukset . Retrovirukset ovat mahdollisesti vaarallisia mutageeneina , koska ne siirtyvät satunnaisesti isäntägenomiin, mikä voi johtaa syöpäkasvaimien syntymiseen. Adeno-assosioituneen viruksen genomi insertoituu yleensä tiettyyn kohtaan, ja satunnaisia ​​insertioita tapahtuu mitättömällä tiheydellä. Kun luodaan adeno-assosioituneeseen virukseen perustuvia vektoreita geeniterapiaan, rep- ja cap -geenit poistetaan viruksen DNA:sta . Haluttu geeni yhdessä promoottorin kanssa insertoidaan käänteisten terminaalisten toistojen väliin ( inverted terminaalitoistot, ITR) , minkä seurauksena tumaan muodostuu konkatameerejä toisen DNA-juosteen synteesin jälkeen solun DNA-polymeraasin toimesta .  Geeniterapian vektorit, jotka perustuvat adeno-assosioituneisiin viruksiin, muodostavat episomaalisia konkatameerejä isäntäsolun tumassa. Jakautumattomissa soluissa nämä konkatameerit pysyvät ehjinä; jakautuvissa soluissa adeno-assosioitunut virus-DNA katoaa solujen jakautumisen aikana, koska episomaalinen DNA ei replikoidu isäntäsolun DNA:n replikaation aikana. Adeno-assosioituneen viruksen DNA:n vahingossa liittäminen isäntägenomiin on hyvin harvinaista. Adeno-assosioituneella viruksella on myös erittäin alhainen immunogeenisyys , jota ilmeisesti rajoittaa neutraloivien vasta -aineiden tuotannon alhainen tehokkuus , kun taas jälkimmäisen ei ole selvästi osoitettu olevan sytotoksinen [9] [10] [11] . Kuvatut ominaisuudet sekä kyky infektoida jakautumattomia soluja määrittävät adeno-assosioituneen viruksen edut adenoviruksiin verrattuna geeniterapiassa.

Adeno-assosioituneen viruksen käytöllä on myös joitain haittoja. Terapeuttisten geenien kloonaukseen käytettävissä olevan virusgenomin kapasiteetti on vain noin 4800 emäsparia . Siten tämä vektori ei sovellu suurten geenien kloonaukseen. Kahden genomin käänteiset terminaalit toistot voivat hybridisoitua ja muodostaa päähäntäkonkatameerejä, mikä lähes kaksinkertaistaa vektorin kapasiteetin.

Villityypin viruksen aiheuttama infektio aiheuttaa usein humoraalisen immuniteetin aktivoitumista . Neutraloivien vasta-aineiden aktiivisuus vähentää joissakin tapauksissa AAV2- serotyypin käyttökelpoisuutta. AAV2 voi myös päästä aivoihin ja on erittäin hermospesifinen .

Kliiniset tutkimukset

Tällä hetkellä adeno-assosioituneet viruspohjaiset lääkkeet (vektorit) kystisen fibroosin ja hemofilian hoitoon ovat menossa kliinisten tutkimusten ensimmäiseen vaiheeseen. Parkinsonin taudin vastaisten lääkkeiden kliinisen kokeen ensimmäisestä vaiheesta on saatu lupaavia tuloksia . Muut kliiniset tutkimukset ovat osoittaneet adeno-assosioituneiden virusvektoreiden turvallisuuden Canavanin taudissa , lihasdystrofiassa ja Bilshovsky-Jansky

Kliiniset tutkimukset vektoreista, jotka perustuvat adeno-assosioituneeseen virusvektoriin [12]
Sairaus Gene Antotapa Testivaihe Koehenkilöiden määrä Tila
kystinen fibroosi CFTR Keuhkot, aerosoli minä 12 Valmis
CFTR Keuhkot, aerosoli II 38 Valmis
CFTR Keuhkot, aerosoli II 100 Valmis
Hemofilia B KORJATA Lihaksensisäinen minä 9 Valmis
KORJATA maksan valtimo minä 6 Valmis
Niveltulehdus TNFR:Fc nivelensisäinen minä yksi Jatkaa
perinnöllinen emfyseema AAT Lihaksensisäinen minä 12 Jatkaa
lihassurkastumatauti Sarkoglykaani Lihaksensisäinen minä kymmenen Jatkaa
Parkinsonin tauti GAD65, GAD67 kallon sisällä minä 12 Valmis [13]
Canavanin tauti AAC kallon sisällä minä 21 Jatkaa
Battenin tauti CLN2 kallon sisällä minä kymmenen Jatkaa
Alzheimerin oireyhtymä NGF kallon sisällä minä 6 Jatkaa
spinaalinen lihasatrofia SMN1 intratekaalinen I–III viisitoista Useita kokeita suoritettu, useita käynnissä ( Zolgensma )

Eturauhassyövän hoitoon liittyvät kliiniset tutkimukset ovat vaiheessa III vuodesta 2005 [12] , mutta nämä ex vivo -tutkimukset eivät sisällä ADV:n suoraa antamista potilaille.

Patologia

Adenoon liittyvän viruksen ei katsota aiheuttavan sairauksia ihmisille. Tämän viruksen on kuitenkin osoitettu olevan miesten hedelmättömyyden riskitekijä [14] . Adeno-assosioituneiden virusten genominen DNA löytyy siemennestenäytteistä , joiden siittiöiden rakenne ja toiminta on heikentynyt . Suoraa yhteyttä tämän infektion ja miesten hedelmättömyyden välillä ei kuitenkaan ole löydetty.

Rooli hepatosellulaarisen karsinooman kehittymisessä

Viimeaikaiset tutkimukset potilailla, joilla on harvinaisia ​​hepatosellulaarisen karsinooman muotoja, viittaavat siihen, että AAV2-viruksella voi olla rooli tämän syövän laukaisijoissa. Koska AAV2-virus kohdistuu geeneihin, joilla on tärkeä rooli solujen lisääntymisessä, tutkijat uskovat, että infektio johtaa niiden yliaktivoitumiseen, mikä johtaa kasvaimen kasvuun. Tämä löytö kyseenalaistaa AAV2-virusten käytön turvallisuuden geeniterapiassa [15] .

Rakenne

Genomi, transkripti ja proteomi

Adeno-assosioituneen viruksen genomi sisältää (+ tai -) yksijuosteisen DNA :n (ssDNA), jonka pituus on noin 4,7 tuhatta nukleotidia. Genomisen DNA-molekyylin päissä on käänteisiä terminaalitoistoja ( ITR :t ) .  Genomi sisältää kaksi avointa lukukehystä ( ORF ) : rep ja cap . Ensimmäinen sisältää neljä päällekkäistä geeniä , jotka koodaavat Rep-proteiineja, jotka ovat välttämättömiä viruksen elinkaaren kannalta , toinen lukukehys sisältää päällekkäisiä kapsidiproteiinien nukleotidisekvenssejä : VP1, VP2 ja VP3, jotka muodostavat kapsidin ikosaedrisen pään [16] .  

Käänteinen pääte toistaa

Käänteisten terminaalisten toistojen sekvenssi ( eng.  Inverted Terminal Repeat, ITR ) on 145 nukleotidia. ITR:t sijaitsevat symmetrisesti adeno-assosioituneiden virusten genomissa ja niitä tarvitaan genomisen DNA :n replikaatioon [17] . Toinen ITR:n ominaisuuksista on kyky muodostaa hiusneuloja, mikä mahdollistaa DNA:n toisen juosteen synteesin ilman primaasin osallistumista . Käänteisiä terminaalitoistoja tarvitaan myös virus-DNA:n integroitumiseen ihmisen yhdeksännentoista kromosomin tietylle alueelle ja provirus -DNA :n vapautumiseen kromosomista [18] [19] sekä adenoassosioituneiden kompleksien muodostumiseen. virus-DNA, jossa on deoksiribonukleaasiresistenttejä vaippaproteiineja [20] .

Geeniterapian tapauksessa ITR:n on oltava cis-asennossa terapeuttisen geenin jälkeen. Tätä mallia käytetään adeno-assosioituneeseen virukseen ( eng.  rekombinantti AAV, rAAV ) perustuvien yhdistelmävektoreiden saamiseksi, jotka sisältävät reportteri- tai terapeuttisia geenejä. On osoitettu, että ITR:itä ei vaadita cis-asennossa replikaatioon ja kapsidin laskostumiseen. Rep- geenin nukleotidisekvenssistä löydettiin cis - toimiva Rep-riippuvainen elementti (CARE ) . Cis-asennossa CARE tehostaa viruspartikkelien replikaatiota ja kokoonpanoa [21] [22] [23] [24] .  

Geenit ja proteiinit rep

" Genomin vasen puoli " sisältää kaksi promoottoria  , p5 ja p19, joista transkriptoidaan kaksi eripituista päällekkäistä mRNA:ta . Jokainen vastaavaa mRNA:ta koodaava geeni sisältää intronin , joka voidaan leikata irti silmukointiprosessin aikana . Tuloksena voidaan syntetisoida neljä erilaista mRNA:ta ja vastaavasti neljä erilaista Rep-proteiinia, joilla on päällekkäiset sekvenssit. Proteiinit nimetään niiden molekyylimassan mukaan kDa :na: Rep78, Rep68, Rep52 ja Rep40 [25] . Rep78 ja 68 sitovat spesifisesti pohjusteena käänteisistä päätetoistoista muodostuneen hiusneulan ja leikkaavat sen sitten pääteresoluutiokohdasta .  Rep78:n ja 68:n on osoitettu tarvittavan adeno-assosioituneen viruksen DNA:n spesifiseen integroitumiseen isäntägenomiin. Neljä Rep-proteiinia sitoo ATP:tä ja niillä on helikaasiaktiivisuutta . Nämä proteiinit tehostavat transkriptiota p40-promoottorista, mutta heikentävät transkriptiota p5- ja p19-promoottoreista [19] [25] [26] [27] [28] [29] .

cap -geenit ja VP-proteiinit

Adeno-assosioituneen viruksen genomisen DNA :n (+) juosteen "oikea puoli" sisältää päällekkäisiä sekvenssejä, jotka koodaavat kolmea kapsidiproteiinia  , VP1, VP2 ja VP3. Näiden geenien transkriptio alkaa yhdestä promoottorista , p40. Vastaavien proteiinien molekyylipaino on vastaavasti 87, 72 ja 62 kDa [30] . Kaikki kolme proteiinia transloidaan samasta mRNA:sta. Transkription jälkeen pre-mRNA voidaan silmukoida kahdella eri tavalla, jolloin pidempi tai lyhyempi introni leikataan pois ja muodostuu 2300 tai 2600 nukleotidin mRNA:ita . Yleensä, erityisesti adenoviruksen läsnä ollessa , pidempi introni leikataan pois. Tässä muodossa ensimmäinen aloituskodoni AUG leikataan pois , josta VP1-proteiinin synteesi alkaa ja VP1-proteiinisynteesin taso laskee. Ensimmäinen kodoni AUG, joka jää jäljelle pidemmän transkriptin tapauksessa, on VP3-proteiinin aloituskodoni. Kuitenkin tätä kodonia edeltävä nukleotidisekvenssi samassa lukukehyksessä sisältää treoniiniaACG koodaavan sekvenssin , jota ympäröi optimaalinen Kozak-sekvenssi . Tämä johtaa VP2-proteiinin synteesin vähenemiseen (joka on VP3-proteiini, jonka N-päässä on ylimääräisiä aminohappotähteitä [31] [32] [33] [34] .

Koska suurempi introni leikataan ensisijaisesti pois pre-mRNA:sta ja koska kodoni ACGon heikompi aloituskodoni, vastaavat proteiinit ilmentyvät in vivo suhteessa noin 1:1:20 ja proteiinit sisältyvät myös viruspartikkeliin. samassa suhteessa [35] . Ainutlaatuisella fragmentilla VP1-proteiinin N-päässä on fosfolipaasi A2 ( PLA2 ) -aktiivisuutta ,  jota todennäköisesti tarvitaan viruspartikkelien vapautumiseen myöhäisistä endosomeista [36] . Muralidar ym. osoittivat, että VP2- ja VP3-proteiinit ovat välttämättömiä viruspartikkelin kokoamisessa [33] . Warrington ym. osoittivat, että VP2-proteiini ei ole ehdottoman välttämätön viruspartikkelin kokoamiseen, eikä se vaikuta viruksen patogeenisiin ominaisuuksiin. Merkittävät insertiot N-terminaaliseen osaan eivät kuitenkaan vaikuta VP2-proteiinin toimintaan, kun taas insertiot VP1:een vähentävät sen fosfolipaasiaktiivisuutta [ 37] .

VP3-proteiinin kiderakenteen määrittelivät vuonna 2002 Xi ja Bew ym . [38] .

Serotyypit ja reseptorit

Vuoteen 2006 mennessä oli kuvattu 11 adeno-assosioitunutta viruksen serotyyppiä [39] . Kaikki tunnetut serotyypit voivat infektoida soluja monissa kudostyypeissä . Kudosspesifisyys määräytyy kapsidiproteiinien serotyypin mukaan , joten adeno-assosioituneet virusvektorit suunnitellaan määrittämään haluttu serotyyppi.

Serotyyppi 2

Adeno-assosioituneen viruksen serotyyppi 2 on laajimmin tutkittu [40] [41] [42] [43] [44] [45] . Adenoihin liittyvällä viruksen serotyypillä 2 on luonnollinen affiniteetti luurankolihaksiin [46] , hermosoluihin [40] , verisuonten sileään lihakseen [47] ja hepatosyytteihin [48] .

Kolme solureseptoria on kuvattu adeno-assosioituneelle viruksen serotyypille 2: heparaanisulfaattiproteoglykaani (HSPG ) , integriini  a Vp5 ja fibroblastikasvutekijäreseptori 1 ( FGFR - 1 ) . Edellinen on ensisijainen reseptori, kaksi jälkimmäistä ovat rinnakkaisreseptoreita ja mahdollistavat adeno-assosioituneen viruksen pääsyn soluun reseptorivälitteisen endosytoosin kautta [49] [50] [51] [52] . HSPG:tä on merkittävästi läsnä ekstrasellulaarisessa aineessa ja se toimii ensisijaisena reseptorina, samalla kun se puhdistaa kehon adeno-assosioituneista viruspartikkeleista ja vähentää infektiotehokkuutta [53] .  

Tutkimukset ovat osoittaneet, että adeno-assosioituneen viruksen serotyyppi 2 tappaa syöpäsoluja vahingoittamatta terveitä soluja. "Tutkimuksemme ovat osoittaneet, että adeno-assosioitunut virus tyyppi 2, joka saastuttaa suuren solupopulaation, tappaa monen tyyppisiä syöpäsoluja, mutta ei terveitä soluja", sanoo Craig Meyer , immunologian ja mikrobiologian professori Penn State College of Medicine. Pennsylvania [54] . Nämä tutkimukset voivat johtaa uusien syöpälääkkeiden luomiseen.

Muut serotyypit

Vaikka adeno-assosioituneen viruksen serotyyppi 2 on suosituin serotyyppi tieteellisessä tutkimuksessa, muiden serotyyppien on osoitettu olevan tehokkaampia geeninkuljetusvektoreita . Esimerkiksi adeno-assosioituneen viruksen serotyyppi 6 infektoi paremmin hengitysteiden epiteelisoluja, serotyypin 7 viruksella on erittäin korkea hiiren luustolihassolujen transduktiotaso , serotyypin 8 virus transdusoi hepatosyyttejä hyvin [55] [56] [57] , ja serotyypin 1 ja 5 virukset ovat erittäin tehokkaita ja toimittavat geenejä verisuonten endoteelisoluihin [58] . Adeno-assosioituneen viruksen serotyyppi 6, joka on serotyyppien 1 ja 2 hybridi [57] , on myös alhaisempi immunogeenisyys kuin serotyypin 2 viruksella [56] .

Serotyypit eroavat reseptoreista, joihin ne sitoutuvat. Esimerkiksi serotyyppien 4 ja 5 virusten transduktio voidaan estää siaalihappoliuoksella [59] , kun taas serotyypin 5 virus pääsee soluihin verihiutaleiden kasvutekijäreseptorin kautta [60] .

Immuunivaste

Adeno-assosioitunut virus on erityisen kiinnostava geeniterapiassa, koska sen kyky indusoida immuunivastetta ihmisissä on rajallinen. Tämä viruksen ominaisuus tekee siitä erityisen sopivan transduktioon , koska se vähentää immuunisairauksien riskiä.

Synnynnäinen immuniteetti

Eläimillä on luontainen immuunivaste adeno-assosioituneelle virukselle. Viruksen suonensisäinen anto hiirille aiheuttaa tulehduksellisten sytokiinien tuotantoa , neutrofiilien ja muiden leukosyyttien tunkeutumista maksaan , mikä näyttää vähentävän merkittävästi injektoitujen viruspartikkelien määrää [61] .

Humoraalinen immuniteetti

On osoitettu, että virus voi aiheuttaa humoraalisen vasteen sekä eläimissä että ihmisissä. Jopa 80 % ihmispopulaatiosta on seropositiivisia serotyyppi 2. On osoitettu, että neutraloivat vasta -aineet voivat vähentää adeno-assosioituneiden virusvektorien transduktiota useilla antoreitillä [62] .

Soluimmuniteetti

Solujen immuunivastetta virukselle ja viruksesta peräisin oleville vektoreille ei ymmärretty hyvin ennen vuotta 2005 [62] . Kliiniset tutkimukset vektorilla, joka perustuu adenoassosioituneen viruksen serotyyppiin 2 hemofilia B:n hoitoon, ovat osoittaneet, että transdusoituneiden solujen tuhoutuminen voi tapahtua [63] . Tutkimukset ovat osoittaneet, että CD8+ T-lymfosyytit voivat tunnistaa adeno-assosioituneen viruksen kapsidin elementtejä in vitro [64] , mikä osoittaa sytotoksisen vasteen mahdollisuuden vektoreille suhteessa T- lymfosyytteihin . Nämä tutkimukset ovat kuitenkin epätäydellisiä, eikä tällaisen sytotoksisen vasteen mahdollisuutta ole täysin tutkittu.

Elinkaari

Adeno-assosioituneen viruksen elinkaaressa soluinfektion vaiheesta uusien viruspartikkelien muodostumiseen voidaan erottaa useita vaiheita:

  1. kiinnittyminen plasmakalvoon
  2. endosytoosi
  3. liikkuminen endosomissa
  4. poistuminen myöhäisestä endosomista tai lysosomista
  5. siirtyä solun ytimeen
  6. replikatiivisen viruksen kaksijuosteisen DNA:n tuotanto
  7. rep -geenin ilmentyminen
  8. genomisen DNA:n replikaatio
  9. cap -geenien ilmentyminen , yksijuosteisen tytär-DNA:n synteesi
  10. virionin kokoonpano
  11. viruspartikkelien vapautuminen infektoidusta solusta

Jotkut näistä vaiheista voivat vaihdella solutyypin mukaan. Viruksen DNA:n replikaation parametrit voivat myös vaihdella samantyyppisten solujen välillä riippuen solusyklin vaiheesta [65] .

Adeno-assosioitunut virus ei pysty replikoitumaan soluissa, jotka eivät ole adenoviruksilla infektoituneita . Tämä viruspartikkelien muodostumisen ominaisuus osoittaa, että adeno-assosioitunut virus on peräisin adenoviruksista. Adeno-assosioituneen viruksen DNA:n replikaation on osoitettu helpottavan tiettyjen proteiinien läsnä ollessa adenoviruksista [66] [67] tai muista viruksista, kuten herpes simplex [68] tai genotoksisista aineista, kuten ultraviolettisäteilystä tai hydroksiureasta [69] [70 ]. ] [71] .

Matsushita ja Ellinger ym . [66] kuvasivat adenovirusgeenien vähimmäisjoukon, joka vaaditaan adeno-assosioituneiden virusten lisääntymiseen . Tämä löytö mahdollisti yhdistelmä-adeno-assosioituneiden virusten luomisen, jotka eivät vaadi yhteisinfektiota adenoviruksen kanssa. Auttajavirusten tai genotoksisten tekijöiden puuttuessa adeno-assosioitunut virus-DNA voidaan liittää isäntägenomiin episomaalisessa muodossa. Ensimmäisessä tapauksessa Rep78- ja Rep68-proteiinit suorittavat integraation isäntägenomiin, ja se vaatii käänteisten terminaalisten toistojen ( ITR ) läsnäolon, jotka reunustavat insertoitua sekvenssiä .  Hiirillä adeno-assosioitunut virusgenomi voi sijaita episomina (pyöreä DNA, pää-häntä-suuntaus) jakautumattomissa kudoksissa – esimerkiksi luurankolihaksessa [72] .

Katso myös

Muistiinpanot

  1. ↑ Virusten taksonomia  Kansainvälisen virustaksonomian komitean (ICTV) verkkosivustolla .
  2. ↑ 1 2 ICTV Taksonomiahistoria: Adeno-assosioitunut dependoparvovirus A ICTV:n verkkosivuilla  ( Käytetty  7. toukokuuta 2017) .
  3. ↑ 1 2 3 4 5 Parvoviridae-heimon taksonomian järkeistäminen ja laajentaminen  : [ fin. ] // ICTVonline. — Annettu koodi: 2013.001a-aaaV. - 2013. - s. 8.
  4. ↑ Grieger JC, Samulski RJ Adeno-assosioitunut virus geeniterapiavektorina: vektorien kehitys, tuotanto ja kliiniset sovellukset  (englanniksi)  // Advances in Biochemical engineering/biotechnology. - Berliini , Saksa , 2005. - Iss. 99 . - s. 119-145. — PMID 16568890 .
  5. ↑ Atchison RW, Castro BC, Hammon WM. Adenovirukseen liittyvät vialliset viruspartikkelit  (englanniksi)  // Tiede. - 1965. - Voi. 149 . - s. 754-756 .
  6. ↑ Smith RH Adenoon liittyvä virusintegraatio: virus versus vektori // Geeniterapia. - 2008. - T. 15 , nro 11 . - S. 817-822 . - doi : 10.1038/gt.2008.55 .
  7. ↑ Ni TH, McDonald WF, Zolotukhin I, Melendy T, Waga S, Stillman B, Muzyczka N. Adeno-assosioituneen viruksen DNA-replikaatioon tarvittavat soluproteiinit adenovirus-yhteisinfektion puuttuessa // J Virol. - 1998. - T. 72 . - S. 2777-2787 .
  8. ↑ Surosky, RT; Urabe, M & Godwin, S.G. et ai. (1997), Adenoon assosioituneet viruksen Rep-proteiinit kohdistavat DNA-sekvenssit ainutlaatuiseen lokukseen ihmisen genomissa, Journal of virology v . 71 (10), PMID 9311886 
  9. ↑ Chirmule, N; Propert, K ​​​​& Magosin, S et al. (1999), Immuunivasteet adenovirukselle ja adeno-assosioituneelle virukselle ihmisissä, Genetherapy (nro syyskuu): 1574-83, PMID 10490767 
  10. ↑ Hernandez, YJ; Wang, J & Kearns, W.G. et ai. (1999), Piilevä adeno-assosioitunut virusinfektio saa aikaan humoraalisia, mutta ei soluvälitteisiä immuunivasteita ei-ihmiskädellisen mallissa, Journal of virology (nro lokakuu): 8549-58, PMID 10482608 
  11. ↑ Ponnazhagan, S; Mukherjee, P & Yoder, MC et ai. (1997), Adeno-associated virus 2-välitteinen geeninsiirto in vivo : elin-tropismi ja transdusoitujen sekvenssien ilmentyminen hiirissä, Gene (nro 29. huhtikuuta): 203-10, PMID 9185868 
  12. ↑ 1 2 Carter, BJ (2005), Adeno-Associated Virus Vectors in Clinical Trials, Human Gene Therapy osa 16: 541-50, PMID 15916479 
  13. ↑ Kaplitt, M.G.; Feigin, A; MJ & muut (2007) aikana, geeniterapian turvallisuus ja siedettävyys adeno-assosioituneen viruksen (AAV) välittämän Parkinsonin taudin GAD-geenin kanssa: avoin, vaiheen I tutkimus, Lancet T. 369: 2097-2105, PMID 17586305 
  14. ↑ Erles K., Rohde V., Thaele M., Roth S., Edler L., Schlehofer JR adeno-associated virus (AAV) DNA kivesten kudoksessa ja epänormaaleissa siemennesinäytteissä   // Hum . jäljentäminen. : päiväkirja. - 2001. - marraskuu ( osa 16 , nro 11 ). - P. 2333-2337 . — PMID 11679515 .
  15. ↑ Nault JC et ai. Toistuva AAV2:een liittyvä insertiomutageneesi ihmisen hepatosellulaarisissa karsinoomissa // Nature genetics. – 2015.
  16. ↑ Carter, BJ (2000), Adeno-assosioitunut virus ja adeno-assosioituneet virusvektorit geenien kuljettamiseen, julkaisussa DD Lassic & N Smyth Templeton, Gene Therapy: Therapeutic Mechanisms and Strategies , New York City : Marcel Dekker, Inc., s. 41-59, ISBN 0-585-39515-2 
  17. ↑ Bohenzky, R.A.; LeFebvre, RB & Berns, KI (1988), Sekvenssi- ja symmetriavaatimukset adeno-assosioituneen viruksen terminaalisen toiston sisäisissä palindromisissa sekvensseissä, Virology ( San Diego : Academic Press). - T. 166 (2), PMID 2845646 
  18. ↑ Wang, XS; Ponnazhagan & Srivastava (1995), Rescue and replikation signals of the adeno-associated virus 2 genome, Journal of Molecular Biology voi. 250: 573-80, PMID 7623375 
  19. ↑ 1 2 Weitzman, MD; Kyostio, S.R.; Kotin, RM & Owens, RA (1994), Adeno-associated virus (AAV) Rep-proteiinit välittävät kompleksin muodostumista AAV-DNA:n ja sen integraatiokohdan välillä ihmisen DNA:ssa, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United of America, osa 91 (13): 5808-12, PMID 8016070 
  20. ↑ Zhou, X & Muzyczka, N (1998), Adeno-assosioituneen viruksen DNA:n in vitro pakkaus, Journal of virology osa 72 (4): 3241-7, PMID 9525651 
  21. ↑ Nony, P; Tessier, J; Chadeuf, G & Ward, P et ai. (2001), Uusi cis-vaikutteinen replikaatioelementti adeno-assosioituneen viruksen tyypin 2 genomissa osallistuu integroitujen rep-cap-sekvenssien monistamiseen, Journal of virology osa 75 (20): 9991-4, PMID 11559833 
  22. ↑ Nony, P; Chadeuf, G; Tessier, J & Moullier, P et ai. (2003), Todisteita rep-cap-sekvenssien pakkaamisesta adeno-assosioituneen viruksen (AAV) tyypin 2 kapsideihin käänteisten terminaalisten toistojen puuttuessa: malli rep-positiivisten AAV-partikkelien luomiseksi, Journal of virology v . 77, PMID 12477885 
  23. ↑ Philpott, NJ; Giraud-Wali, C; Dupuis, C & Gomos, J et ai. (2002), Rekombinanttien adeno-assosioituneiden virus-DNA-vektorien tehokas integrointi vaatii p5-rep-sekvenssin cis:ssä, Journal of virology v . 76 (11), PMID 11991970 
  24. ↑ Tullis, GE & Shenk, T (2000), Adeno-assosioituneiden virustyypin 2 vektorien tehokas replikaatio: cis-toiminen elementti terminaalisten toistojen ulkopuolella ja minimaalinen koko, Journal of virology T. 74 (24), PMID 11090148 
  25. ↑ 1 2 Kyostio, S.R.; Owens, R.A.; Weitzman, M.D. & Antoni, B.A. et ai. (1994), Adeno-assosioituneen viruksen (AAV) villityypin ja mutantti-Rep-proteiinien analyysi niiden kyvystä säädellä negatiivisesti AAV:n p5- ja p19-mRNA-tasoja, Journal of virology osa 68 (5): 2947-57, PMID 8151765 
  26. ↑ Im, DS & Muzyczka, N (1990), AAV-alkuperää sitova proteiini Rep68 on ATP-riippuvainen paikkaspesifinen endonukleaasi, jolla on DNA-helikaasiaktiivisuutta., Cell T. 61 (3): 447-57, PMID 2159383 
  27. ↑ Im, DS & Muzyczka, N (1992), Adeno-assosioituneen viruksen Rep78, Rep52 ja Rep40 osittainen puhdistus ja niiden biokemiallinen karakterisointi, Journal of virology osa 66 (2): 1119-28, PMID 1309894 
  28. ↑ Samulski, RJ (2003), AAV-vektorit, ihmisen geeniterapian tulevaisuuden työhevonen, Ernst Schering Research Foundationin työpaja (nro 43): 25-40, PMID 12894449 
  29. ↑ Trempe, JP & Carter, BJ (1988a), Adeno-assosioituneen virusgeenin ilmentymisen säätely 293-soluissa: mRNA:n runsauden ja translaation kontrollointi, Journal of virology (nro 1): 68-74, PMID 2824856 
  30. ↑ Jay, FT; Laughlin, CA & Carter, BJ (1981), eukaryoottinen translaatiokontrolli: adenoviruksen DNA:ta sitovan proteiinin mutaatio vaikuttaa adenoviruksen proteiinisynteesiin, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United of America T. 78 (5): 2927-31, PMID 6265925 
  31. ↑ Becerra, S. P.; Rose, JA; Hardy, M & muut (1985), Adeno-assosioituneiden viruskapsidiproteiinien B ja C suora kartoitus: mahdollinen ACG-aloituskodoni, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United of America, osa 82 (23): 7919- 23, PMID 2999784 
  32. ↑ Cassinotti, P; Weitz, M & Tratschin, JD (1988), Adeno-assosioituneen viruksen (AAV) kapsidigeenin organisaatio: viruksen kapsidiproteiinia 1 koodaavan vähäisen silmukoituneen mRNA:n kartoitus, Virology T. 167 (1): 176-84 , PMID 2847413 
  33. ↑ 1 2 Muralidhar, S; Becerra, SP & Rose, JA (1994), Adeno-assosioituneen viruksen tyypin 2 rakenneproteiinin aloituskodonien paikkasuuntautunut mutagenees: vaikutukset synteesin ja biologisen aktiivisuuden säätelyyn, Journal of virology osa 68 (1): 170-6, PMID 8254726 
  34. ↑ Trempe, JP & Carter, BJ (1988b), Adeno-assosioituneen viruksen VP1-kapsidiproteiinin synteesiä varten tarvitaan vaihtoehtoinen mRNA-silmukointi, Journal of virology v . 62 (9): 3356-63, PMID 2841488 
  35. ↑ Rabinowitz, JE & Samulski, RJ (2000), Paremman vektorin rakentaminen: AAV-virionien manipulointi, Virology T. 278 (2): 301-8, PMID 11118354 
  36. ↑ Girod, A; Wobus, CE; Zádori, Z & muut (2002), Adeno-assosioituneen viruksen tyypin 2 VP1-kapsidiproteiini kantaa fosfolipaasi A2-domeenia, jota tarvitaan viruksen tarttuvuutta varten, The Journal of general virology T. 83 (5): 973-8, PMID 11961250 
  37. ↑ Warrington, KH, Jr; Gorbatyuk, käyttöjärjestelmä; Harrison, JK ja muut (2004), Adeno-assosioituneen viruksen tyypin 2 VP2-kapsidiproteiini on tarpeeton ja voi sietää suuria peptidin insertioita N-päähän, Journal of virology osa 78 (12): 6595-609, PMID 15163751 
  38. ↑ Xie, Q; Bu, W; Bhatia, S & muut (2002), The atomic structure of adeno-associated virus (AAV-2), ihmisen geeniterapian vektori, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United of America, osa 99(16): 10405-10 , PMID 12136130 
  39. ↑ Mori, S; Wang, L; Takeuchi, T & Kanda, T (2004), Kaksi uutta adeno-assosioitunutta virusta cynomolgus-apinasta: kapsidiproteiinin pseudotyyppien karakterisointi, Virology T. 330 (2): 375-83, PMID 15567432 
  40. ↑ 12 Bartlett, J.S .; Samulski, RJ; McCown, TJ ja muut (1998), Adeno-assosioituneen viruksen tyypin 2 selektiivinen ja nopea sisäänotto aivoissa, Human genetherapy osa 9 (8): 1181-6, PMID 9625257 
  41. ↑ Fischer, AC; Beck, SE; Smith, CI & muut (2003), Onnistunut siirtogeenin ilmentyminen sarjaannoksilla aerosolisoituja rAAV2-vektoreita reesusmakakeissa, Molecular therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy osa 8 (6): 918-26, PMID 14664794 
  42. ↑ Nicklin, SA; Buening, H; Dishart, KL ja muut (2001), Tehokas ja selektiivinen AAV2-välitteinen geeninsiirto, joka on suunnattu ihmisen verisuonten endoteelisoluihin, Molecular therapy: American Society of Gene Therapy -lehti, osa 4 (3): 174-81, PMID 11545607 
  43. ↑ Rabinowitz, JE; Xiao, W & Samulski, RJ (1999), AAV2-kapsidin insertiomutageneesi ja rekombinanttiviruksen tuotanto, Virology T. 265 (2): 274-85, PMID 10600599 
  44. ↑ Shi, W & Bartlett, JS (2003), RGD:n sisällyttäminen VP3:een tarjoaa adeno-assosioituneita virustyyppi 2 (AAV2) -pohjaisia ​​vektoreita, joissa on heparaanisulfaatista riippumaton solun sisäänpääsymekanismi, Molecular therapy : American Society of Gene -julkaisu Therapy T. 7 (4): 515-25, PMID 12727115 
  45. ↑ Wu, P; Xiao, W; Conlon, T & muut (2000), Adeno-assosioituneen viruksen tyypin 2 (AAV2) kapsidigeenin mutaatioanalyysi ja AAV2-vektorien rakentaminen, joissa on muuttunut tropismi, Journal of virology osa 74 (18): 8635-47, PMID 10954565 
  46. ↑ Manno, CS; Chew, AJ; Hutchison, S & muut (2003), AAV-välitteinen tekijä IX -geeninsiirto luustolihakseen potilailla, joilla on vaikea hemofilia B, Blood T. 101 (8): 2963-72, PMID 12515715 
  47. ↑ Richter, M; Iwata, A; Nyhuis, J & muut (2000), Adeno-assosioitunut virusvektori transduktio verisuonten sileissä lihassoluissa in vivo , Physiological genomics osa 2 (3): 117-27, PMID 11015590 
  48. ↑ Koeberl, D.D.; Alexander, IE; Halbert, CL & muut (1997), Ihmisen hyytymistekijä IX:n jatkuva ilmentyminen hiiren maksasta adeno-assosioituneiden virusvektorien suonensisäisen injektion jälkeen, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United of America, osa 94 (4): 1426 -31, PMID 9037069 
  49. ↑ Qing, K; Mah, C; Hansen, J & muut (1999), Ihmisen fibroblastikasvutekijäreseptori 1 on adeno-assosioituneen virus 2:n infektion rinnakkaisreseptori, Nature Medicine T. 5 (1): 71-7, PMID 9883842 
  50. ↑ Summerford, C & Samulski, RJ (1998), Membraaniin liittyvä heparaanisulfaattiproteoglykaani on adeno-assosioituneen viruksen tyypin 2 virionien reseptori, Journal of virology T. 72 (2): 1438-45, PMID 9445046 
  51. ↑ Summerford, C; Bartlett, JS & Samulski, RJ (1999), AlphaVbeta5-integriini: adeno-assosioituneen virustyypin 2 infektion rinnakkaisreseptori, Nature Medicine T. 5 (1): 78-82, PMID 9883843 
  52. ↑ Qiu, J; Handa, A; Kirby, M & Brown, KE (2000), Hepariinisulfaatin ja adeno-assosioituneen viruksen vuorovaikutus 2, Virology T. 269 (1): 137-47, PMID 10725206 
  53. ↑ Pajusola, K; Gruchala, M; Joch, H & muut (2002), Solutyyppispesifiset ominaisuudet moduloivat adeno-assosioituneen viruksen tyypin 2 transduktiotehokkuutta ja hillitsevät endoteelisolujen infektiota, Journal of virology T. 76 (22): 11530-40, PMID 12388714 
  54. ↑ CNN.com (2005), yleinen virus "tappaa syövän" , < http://www.cnn.com/2005/HEALTH/06/22/cancer.virus/index.html > 
  55. ↑ Gao, G.P.; Alvira, M.R.; Wang, L & muut (2002), Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States, osa 99 (18): 11854-9, PMID 12192090 
  56. ↑ 12 Halbert , C.L.; Allen, JM & Miller, AD (2001), Adeno-associated virus type 6 (AAV6) -vektorit välittävät tehokasta hengitysteiden epiteelisolujen transduktiota hiiren keuhkoissa verrattuna AAV2-vektoreihin, Journal of virology. (J Virol) heinäkuu; (): T. 75 (14): 6615-24, PMID 11413329 
  57. ↑ 1 2 Rabinowitz, JE; Bowles, D.E.; Faust, SM & muut (2004), Crossdressing the virion: the transkapsidation of adeno-assosiated virus serotypes toiminnallisesti määrittelee alaryhmät, Journal of virology osa 78 (9): 4421-32, PMID 15078923 
  58. ↑ Chen, S; Kapturczak, M; Loiler, SA & muut (2005), Tehokas vaskulaaristen endoteelisolujen transduktio rekombinantti adeno-assosioituneen viruksen serotyypin 1 ja 5 vektoreilla, Human genetherapy osa 16 (2): 235-47, PMID 15761263 
  59. ↑ Kaludov, N; Brown, K.E.; Walters, RW ja muut (2001), Adeno-associated virus serotype 4 (AAV4) ja AAV5 vaativat molemmat siaalihappositoutumista hemagglutinaatioon ja tehokkaaseen transduktioon, mutta eroavat siaalihapposidosspesifisyydestä, Journal of virology T. 75 (15): 6884- 93, PMID 11435568 
  60. ↑ Di Pasquale, G; Davidson, B.L.; Stein, CS ja muut, PDGFR:n tunnistaminen AAV-5-transduktion reseptorina, Nature Medicine T. 9 (10): 1306-12, PMID 14502277 
  61. ↑ Zaiss, A.K.; Liu, Q; Bowen, GP ja muut (2002), Differential Activation of Intemune Responses by Adenovirus and Adeno-Associated Virus Vectors, Journal of Virology osa 76(9): 4580-90, PMID 11932423 
  62. ↑ 1 2 Zaiss, AK & Muruve, DA (2005), Immuunivasteet adeno-assosioituneille virusvektoreille, Current Gene Therapy osa 5 (3): 323-31, PMID 15975009 
  63. ↑ Korkea, K.A.; Mannos, CS; Pierce, GF & muut (2006), Onnistunut maksan transduktio hemofiliassa AAV-tekijä IX:n avulla ja isännän immuunivasteen asettamat rajoitukset, Nature Medicine osa 12 (3): 342-47, PMID 16474400 
  64. ↑ Korkea, K.A.; Sabatino, D.E.; Mingozzi, F & muut (2005), Hiiren AAV-kapsidispesifisten CD8+ T-soluepitooppien tunnistaminen, Molecular Therapy T. 12 (6): 1023-33, PMID 16263332 
  65. ↑ Rohr, U.P.; Kronenwett, R; Grimm, D & muut (2002), Ihmisen primaariset solut eroavat herkkyydestään rAAV-2-välitteiselle geeninsiirrolle ja reportterigeenin ilmentymisen kestosta, Journal of virological method, osa 105 (2): 265-75, PMID 12270659 
  66. ↑ 1 2 Matsushita, T; Elliger, S; Elliger, C & muut (1998), Adenoon liittyviä virusvektoreita voidaan tuottaa tehokkaasti ilman auttajavirusta, Gene therapy osa 5 (7): 938-45, PMID 9813665 
  67. ↑ Myers, M.W.; Laughlin, CA; Jay, FT & muut (1980), Adenoviruksen auttajatoiminto adeno-assosioituneen viruksen kasvussa: lämpötilaherkkien mutaatioiden vaikutus adenoviruksen varhaisessa geenialueella 2, Journal of virology osa 35 (1): 65-75, PMID 6251278 
  68. ↑ Handa, H & Carter, BJ (1979), Adeno-associated virus DNA replikaatiokompleksit herpes simplex -viruksella tai adenoviruksella infektoiduissa soluissa, The Journal of biological chemistry T. 254 (14): 6603-10, PMID 221504 
  69. ↑ Yalkinoglu, A.O.; Heilbronn, R; Bürkle, A & muut (1988), adeno-assosioituneen viruksen DNA-amplifikaatio vasteena solujen genotoksiselle stressille, Cancer research osa 48 (11): 3123-9, PMID 2835153 
  70. ↑ Yakobson, B; Koch, T & Winocour, E (1987), Adeno-assosioituneen viruksen replikaatio synkronoiduissa soluissa ilman auttajavirusta, Journal of virology T. 61 (4): 972-81, PMID 3029431 
  71. ↑ Yakobson, B; Hrynko, T. A.; Peak, MJ & Winocour, E (1989), Adeno-assosioituneen viruksen replikaatio soluissa, jotka on säteilytetty UV-valolla aallonpituudella 254 nm, Journal of virology osa 63 (3): 1023-30, PMID 2536816 
  72. ↑ Duan, D; Sharma, P; Yang, J & muut (1998), Rekombinantin adeno-assosioituneen viruksen sirkulaariset välituotteet ovat määrittäneet rakenteellisia ominaisuuksia, jotka ovat vastuussa pitkäaikaisesta episomaalisesta pysyvyydestä lihaskudoksessa, Journal of virology osa 72 (11): 8568-77, PMID 9765395 


Kirjallisuus

  • Shakhbazov A.V., Severin I.N., Goncharova N.V., Grinev V.V., Kosmacheva S.M., Potapnev M.P. Virusvektorit ihmisen mesenkymaalisten kantasolujen stabiiliin transduktioon: adeno-assosioituihin viruksiin ja lentiviruksiin perustuvat järjestelmät // Soluteknologiat biologiassa ja lääketieteessä. - 2008. - T. 4 . - S. 216-218 .