Trombiinin muodostumistesti on olennainen veren hyytymisjärjestelmän tilan indikaattori .
Trombiini on veren hyytymisjärjestelmän pääentsyymi. Se katalysoi tämän järjestelmän pääreaktiota, fibrinogeenin muuttumista fibriiniksi . Lisäksi trombiini suorittaa järjestelmän pääsääntelyn aktivoiden hyytymistekijät V, VIII, VII, XI, XIII, proteiini C, verihiutaleet, trombiinin aktivoima fibrinolyysin estäjä. Lopuksi (mikä on tärkeää käytännön näkökulmasta) trombiinia muodostuu koagulaation aikana enemmän (10–100 kertaa) kuin kaikkia muita koagulaatioseriiniproteaaseja yhteensä. Trombiinin kinetiikan tutkimus voi antaa paljon lisätietoa, jota ei ole saatavilla pelkän hyytymiskinetiikan havainnoinnin perusteella. Fibriinihyytymä on vain hyytymisprosessin lopputulos; on tärkeää tarkkailla sitä, mutta ymmärtääkseen prosessin mekanismeja on katsottava syvemmälle.
Trombiinin pitoisuuden seurantamenetelmät ilmestyivät melko kauan sitten: jo 1960-luvulla trombiinin muodostumisen kinetiikkaa tutkittiin erittäin aktiivisesti. Klassinen menetelmä trombiinikonsentraation määrittämiseen oli hyytyminen: näyte, jonka trombiinikonsentraatiota ei tiedetä, sekoitettiin uudelleen kalkkiutumattomaan plasmaan (kuten trombiiniaikatestissä) ja trombiinipitoisuus määritettiin hyytymisajasta. Trombiinikonsentraation aikakäyrän piirtämiseksi otettiin näytteitä lyhyin aikavälein. Yhden käyrän mittaaminen vaati kahden korkeasti koulutetun laborantin koordinoitua työtä tunnin ajan, ja menetelmän laaja kliininen sovellus oli käsittämätön.
Kromogeenisten ja sitten fluorogeenisten substraattien tulo 1980-luvulla mullisti veren hyytymisen tutkimuksen [1] , [2] . Tällainen synteettinen substraatti on molekyyli, jonka seriiniproteinaasi tunnistaa ja katkaisee . Tämä viilto johtaa signaalimolekyylin, leiman, katkaisemiseen substraatista. Etiketti joko muuttaa liuoksen optista tiheyttä (kromogeeninen eli värjäävä substraatti) tai pystyy fluoresoimaan valaistuna (fluorogeeninen substraatti). Trombiinisubstraatteja voitiin lisätä suoraan plasmaan ja hyytymissignaali voidaan tallentaa. Signaalin kasvunopeus on tällöin verrannollinen trombiinikonsentraatioon, joten trombiinin aikariippuvuus saadaan kokeellisesta käyrästä yksinkertaisella differentiaatiolla ja normalisoinnilla standardikäyrään. Varhaiset kromogeeniset substraatit eivät olleet kovin käteviä trombiinin muodostumisen mittaamiseen, koska ne vaativat plasmadefibrinaatiota; muuten hyytymän ulkonäkö häiritsi väriaineen ulkonäön havainnointia. Mutta fluorogeeniset substraatit, jotka leikattaessa antoivat kirkkaan valon leiman, mahdollistivat trombiinin muodostumisen mittaamisen suoraan tavallisessa plasmassa. Tuottavuuden kasvu oli valtava: sen sijaan, että kaksi ihmistä olisi mitannut samaa käyrää koko tunnin ajan, yksi henkilö saattoi ladata levylle näytteitä, laittaa ne levyfluorimetriin ja saada tunnissa tietoja useista kymmenistä näytteistä.
Klinikalla on 1990-luvulta lähtien käytetty aktiivisesti uutta trombiininmuodostusmenetelmää. Konrad Hemkerin Alankomaissa kehittämä ja kehittämä lähestymistapa on joka vuosi yhä enemmän käytössä Euroopassa, ja viime vuosina se on tullut saataville myös lähes kaikkialla maailmassa, myös Venäjällä. Tämän menetelmän luojan venäjänkielinen yleiskatsaus löytyy kohdasta [3] . Tyypillinen trombiinin muodostumiskäyrä on esitetty kohdassa [1] .
Siinä erotetaan pääsääntöisesti kaksi pääparametria: viiveaika (koagulaatioviiveaika) ja endogeeninen trombiinipotentiaali (trombiinin muodostumiskäyrän alla oleva alue). Lukuisat kokeet ja testit ovat osoittaneet, että nämä kaksi parametria ovat tehokkaita patologisten prosessien indikaattoreita.
Kuten tromboelastografiassa , trombiinin muodostumistestien tulokset riippuvat merkittävästi koeolosuhteista: aktivointimenetelmästä, aktivaattorin pitoisuudesta, verihiutalevähennyksen tai rikkaan plasman käytöstä, apuaineiden lisäämisestä. Näitä parametreja muuttamalla on mahdollista havaita erilaisia hyytymishäiriöitä. Normaalia aktivointia pienellä määrällä kudostekijää huonossa plasmassa käytetään havaitsemaan poikkeavuuksia plasman koagulaatiossa [4] . Se on kätevä näytteiden massaanalyysiin, varsinkin kun niitä on kuljetettava tai pakastettava. Trombiinin muodostuminen rikkaassa plasmassa voi lisäksi havaita verihiutaleiden hyytymishäiriöitä ja havaita onnistuneesti verenvuototaipumusta Glanzmannin trombostheniassa, Bernard-Soulierin oireyhtymässä, verihiutaleiden torjuntaan liittyvissä lääkkeissä [5] . Jos trombomoduliinia lisätään plasmaan , tämä testi alkaa jopa havaita joitain hyperkoaguloituvia häiriöitä: hyytymistekijä V Leiden-mutaatio, oraalisten ehkäisyvalmisteiden ottamisen seuraukset ja muut [6] .