Kokoekskluusiokromatografia

Geelisuodatus tai kokoekskluusiokromatografia (seula-, geelipermeaatio-, geelisuodatuskromatografia) on eräänlainen kromatografia , jonka aikana ainemolekyylit erottuvat kooltaan niiden erilaisen kyvyn vuoksi tunkeutua stationaarifaasin huokosiin. Tässä tapauksessa suurimmat (suuremman molekyylimassan ) molekyylit, jotka pystyvät tunkeutumaan kiinteän faasin vähimmäismäärään huokoset, poistuvat ensimmäisinä kolonnista. Aineet, joilla on pieni molekyylikoko ja jotka tunkeutuvat vapaasti huokosiin, tulevat ulos viimeisenä. Toisin kuin adsorptiokromatografia , geelisuodatuksen aikana stationäärinen faasi pysyy kemiallisesti inerttinä eikä ole vuorovaikutuksessa erotettavien aineiden kanssa.

Periaate

Kolonniin syötetään näyteliuos , jonka tilavuus rajoittaa kromatografian laatua. Analyyttisissa erotuksissa se ei saa ylittää 0,1 % CV:stä (kolonnin kokonaistilavuus) ja preparatiivisessa puhdistuksessa se ei saa ylittää 8-10 % CV:stä. Kolonni on pakattu jauheella, jonka hiukkasissa tai rakeissa on tietyn halkaisijan omaavia huokosia. Makromolekyyliset aineet, jotka eivät sisälly huokosiin, kulkevat rakeiden välissä, joten niiden retentiotilavuus on yhtä suuri kuin kolonnin tilavuus miinus stationaarifaasin tilavuus (ns. vapaa tilavuus ). He eluoivat ensin. Keskikokoiset molekyylit sopivat sorbentin huokosiin, mutta eivät kokonaan. Siksi niiden retentiotilavuus on hieman suurempi kuin vapaa tilavuus. He eluoivat sekunnin. Pienimmät molekyylit tulevat vapaasti huokosiin yhdessä liuotinmolekyylien kanssa. Siksi niiden retentiotilavuus kolonnissa on paljon suurempi kuin vapaa tilavuus ja lähestyy kolonnin kokonaistilavuutta (eli 100 % CV). He eluoivat viimeisen.

Sorbentit

Geeli on heterogeeninen järjestelmä, jossa liikkuva faasi (yleensä vesi) on aina kiinteän tai kiinteän faasin huokosten sisällä, jota kutsutaan geelimatriiksi.

Matalapaine

Korkea paine