Replikamenetelmä (mikrobiologia)

Kokeneet kirjoittajat eivät ole vielä tarkistaneet sivun nykyistä versiota, ja se voi poiketa merkittävästi 16. elokuuta 2021 tarkistetusta versiosta . tarkastukset vaativat 32 muokkausta .

Replikointi on mikrobiologinen tekniikka, jossa yhteen tai useampaan sekundaariseen petrimaljaan, jotka sisältävät erilaisia ​​kiinteitä (agarpohjaisia) selektiivisiä kasvualustoja (ilman ravinteita tai jotka sisältävät kemiallisia kasvun estäjiä, kuten antibiootteja), ympätään samoilla mikro-organismipesäkkeillä primaarisesta petrimaljasta. ., toistaen alkuperäisen spatiaalisen kuvan bakteeripesäkkeiden sijainnista suhteessa toisiinsa.

Historia

Vuonna 1925 Esther ja Joshua Lederberg ehdottivat pesäkkeiden leviämismenetelmää.

Lederberg pyrki käyttämään kangasta, joka voidaan steriloida ja jossa on myös pystysuora nukka, joka muistuttaa kaksiulotteista analogista "lankaharjaa" - klassista pesäkkeiden siirtotyökalua.

Aluksi käytettiin paperia ja nailonsamettiä, mutta näiden pinnoitteiden valmistus lopetettiin myöhemmin useiden ongelmien vuoksi, kuten paperin vääristäminen bakteeripesäkkeen alkuperäistä kuviota ja nailonsametti oli liian kallista. Siten postimerkin kanneksi valittiin puuvillavakosametti.

Replica-menetelmä löytää sen sovelluksen sekä pro-(bakteerien) että eukaryoottien (hiiva) mikrobiologiassa.

Menetelmä

Siirtoon käytetään Lederberg-leimasinta: steriili samettikangas venytetään sylinterin päälle, jonka halkaisija on samanlainen kuin petrimaljan sisähalkaisija. Ensin tämä leima painetaan alkuperäistä petrimaljaa vasten, joka on kasvanut pesäkkeillä ja sitten vielä kasvamattomilla. Siirretään materiaali kustakin pesäkkeestä samassa paikassa itämättömälle levylle, jota inkuboidaan pesäkkeiden kasvattamiseksi.

Samettipakkakuidut estävät pesäkkeiden tahriintumista. Siten alkuperäisestä petrimaljasta (matriisista), joka on peitetty pesäkkeillä, voidaan tehdä useita jäljennöksiä erilaisille geeliväliaineille.

Pääsääntöisesti ~30-300 pesäkettä siirretään, koska jokainen pesäke on vaikea eristää erikseen.

Sovellus

Replikamenetelmällä voidaan etsiä ja eristää puutteellisia mutantteja eli mikro-organismeja, jotka toisin kuin kantakanta eivät pysty tuottamaan tiettyjä kasvulleen ja lisääntymiselle välttämättömiä aineita ja ovat siksi riippuvaisia ​​näiden aineiden läsnäolosta elatusaine.

Kirjallisuus

Arnold Berk, David Baltimore, Harvey Lodish, James Darnell, Paul Matsudaira, S. Lawrence Zipursky: Molekulare Zellbiologie . 2. Auflage, Walter de Gruyter, 1996. ISBN 9783110810578, S. 199

Linkit