Käänteistranskription PCR

Molekyylibiologiassa käänteistranskriptiopolymeraasiketjureaktiota kutsutaan yleisesti RT - PCR : ksi .  RT-PCR on menetelmä ribonukleiinihapon ( RNA ) spesifisen fragmentin monistamiseksi . [yksi] 

Yksijuosteinen RNA-molekyyli muunnetaan käänteistranskriptioreaktiossa (RT, eng.  RT, käänteistranskriptio ) komplementaariseksi DNA: ksi ( cDNA ) ja sitten jo yksijuosteinen DNA -molekyyli monistetaan käyttämällä perinteistä PCR :ää . RT-PCR:ää ei pidä sekoittaa reaaliaikaiseen PCR:ään ( Q - PCR ), josta käytetään joskus myös virheellistä lyhennettä RT-PCR .  [2]

Menetelmän kuvaus

Käänteistranskriptaasia käytetään muuntamaan RNA-sekvenssi komplementaariseksi DNA :ksi :

• 1. Ensimmäisen ketjun reaktio: Täydentävä DNA ( cDNA ) muodostuu mRNA-templaattiin dNTP : istä käänteiskopioijaentsyymin vaikutuksesta. Reaktiokomponentteja sekoitetaan DNA - alukkeen ja käänteistranskriptaasipuskurin kanssa yhden tunnin ajan 37 °C:ssa.
• 2. Toisen ketjun reaktio: Kun käänteistranskriptio on valmis ja cDNA on muodostunut mRNA-templaattiin, seuraavat syklit suoritetaan standardin PCR-menetelmän mukaisesti .

30 monistusjakson jälkeen luodaan miljoonia kopioita halutusta sekvenssistä. [2]

Sovellus

RT-PCR:ää käytetään havaitsemaan RNA-molekyylejä näytteestä, jolla on tunnettu sekvenssialue, joka on komplementaarinen alukkeelle. Eksponentiaalinen monistus RT-PCR:llä on herkkä tekniikka, jolla voidaan havaita pieni määrä RNA-molekyylejä.

Esimerkkinä ovat RNA-virukset, kuten ihmisen immuunikatovirus (HIV), joka on retrovirus ja käyttää siksi HIV - käänteiskopioijaentsyymiä syntetisoimaan virus - DNA:ta, joka sitten integroituu isäntägenomiin . 

RT-PCR:ää käytetään myös laajasti geneettisten sairauksien diagnosointiin ja spesifisten RNA-molekyylien semikvantitatiiviseen määritykseen solussa tai kudoksessa indikaattorina vastaavien geenien ilmentymisestä [ 3] .

Katso myös

• Polymeraasiketjureaktio (PCR)
• reaaliaikainen PCR

Muistiinpanot

1. ↑ Hunt M. (2006) Reaaliaikainen PCR-opetusohjelma - Copyright 2006, Etelä-Carolinan yliopiston johtokunta . Haettu 20. lokakuuta 2009. Arkistoitu alkuperäisestä 4. lokakuuta 2009. (määrätön)
2. ↑ 1 2 Glik B., Pasternak J. Molecular biotechnology. Periaatteet ja soveltaminen. - Moskova: Mir, 2002. - 589 s. — ISBN 5030033289 .
3. ↑ Bustin SA Journal of Molecular Endocrinology, 25 // Absoluuttinen mRNA : n kvantifiointi käyttäen reaaliaikaisia ​​käänteistranskriptiopolymeraasiketjureaktiomäärityksiä  . - 2000. - s. 169-193.

Kirjallisuus

• Glick B., Pasternak J. Molecular biotechnology. Periaatteet ja soveltaminen. - Moskova: Mir, 2002. - 589 s. — ISBN 5030033289 .

Sanakirjat ja tietosanakirjat	iso kiinalainen Britannica (verkossa)