Kiinnitys (histologia)

Kiinnitys on mikroskopiaan tarkoitetun näytteen käsittelyä niiden rakenteiden säilyttämiseksi mahdollisimman pitkälle muuttumattomana [1] . Muutoin näyte muuttuu omien entsyymiensä, mätänevien organismien vaikutuksesta ja muista syistä tutkimukseen kelpaamattomaksi. Sitä käytetään histologiassa ja mikrobiologiassa , patologisessa anatomiassa . Yleisimmät kemialliset kiinnitysmenetelmät; mikrobiologiassa käytetään usein lämmön kiinnitystä.

Näytteen kiinnitys edeltää sen värjäystä, lukuun ottamatta elintärkeää värjäystä . Histologiassa kiinnitys on vaihe välittömästi näytteenoton jälkeen.

Yleiset vaatimukset puristimille

• Kiinnittimien tulee toimia nopeasti.
• Ei saa aiheuttaa kudosten muodonmuutoksia tai tehdä niistä hauraita.
• Niiden on siirrettävä solujen sisältö veteen ja muihin lääkkeen jatkokäsittelyssä käytettyihin nesteisiin liukenemattomaan tilaan.
• Ei saa aiheuttaa lääkkeen tummumista, vaan päinvastoin edistää sen valaistumista.
• Ei saa muodostaa kiinnitysartefakteja soluihin .
• Ei saa häiritä valmisteen värjäytymistä valitulla menetelmällä. Tämä pätee erityisesti käytettäessä immunohistokemiallisia värjäysmenetelmiä; Esimerkiksi tavanomaista formaliinia käytettäessä antigeenisiä rakenteita ei usein voida havaita, tällaisissa tapauksissa on suositeltavaa käyttää puskuroitua (neutraalia) formaliinia.

Kiinnitystyypit

Ei ole olemassa universaaleja kiinnittimiä, jotka sopivat yhtä hyvin kaikkiin tarkoituksiin. Kiinnitysliuoksen valinta perustuu sen etuihin ja haittoihin tietyntyyppisen materiaalin kanssa työskentelyssä ja soveltuvuuteen tiettyyn mikroskooppiseen tutkimusmenetelmään.

Formaliini

Yleisin kiinnitysliuostyyppi . Yksinkertainen, halpa, suhteellisen pieni riski työntekijälle. Formaldehydin vesiliuoksia käytetään puhtaassa muodossa ja osana seoksia muiden aineiden kanssa, esimerkiksi etikkahapon kanssa . Formaliinikiinnitysaineiden haittana on liiallinen kudosten tiivistyminen [2] . Lisäksi puhdasta formaliinia käytettäessä valkoinen sakka ( muurahaishapon kiteitä ) on usein mahdollista. Siksi "puskuroitua" neutraalia formaliinia käytetään useammin.

Spirits

Puhdasta etyylialkoholia käytetään harvoin, koska se voi rypistää materiaalia.

• Shafferin seos  - koostuu 2 osasta 80 % etyylialkoholia ja 1 osasta formaliinia. Kiinnityksen kesto 1-2 päivää.
• Carnoyn seos  - 6 osasta absoluuttista etyylialkoholia, 3 osasta kloroformia ja 1 osasta etikkahappoa. Valmistettu välittömästi ennen käyttöä. Kiinnityksen kesto 1/2 - 3 tuntia. Seos soveltuu tiheäkuoristen esineiden (hyönteiset, pyöreät madot) kiinnittämiseen.
• Dietrichin neste on etyylialkoholin, formaliinin, etikkahapon ja veden seos. Kiinnityksen kesto 8 - 24 tuntia. Sopii niveljalkaisille [3] .

Perustuu pikriinihappoon

Pikriinihappopohjaisilla seoksilla kiinnitetyt esineet ovat epästabiileja vedessä, joten kiinnityksen jälkeen esine siirretään 70 % alkoholiin. Kiinnityksen jälkeen esine saa keltaisen värin, mikä ei yleensä häiritse työtä.

• Pikriini- ja etikkahapon seos. Pikriinihapon kyllästetty liuos 10 % etikkahapossa. Sopii pienille ja herkille esineille.
• Bouin sekoitus . 15 osaa pikriinihapon kyllästettyä vesiliuosta, 5 osaa formaliinia, 1 osa etikkahappoa. Kiinnityksen kesto on 2 tuntia. Sitten esineitä voidaan säilyttää pitkään ilman pilaantumista suoraan kiinnitysliuoksessa [3] .

Sublimoi

Sublimaattipohjaiset kiinnitysaineet toimivat hitaasti. käytetään histologiassa. Hyviä ydinkiinnitysaineita [4] .

Osmihappo

Osmihappoon perustuvat kiinnitysaineet muuttavat vain vähän kudosten ja solujen rakennetta. Hyviä ydinkiinnitysaineita. Ne värjäävät rasvat tummalla värillä [5] . Elektronimikroskopiassa sitä käytetään varjoaineena. Äärimmäinen myrkyllisyys ja korkeat kustannukset rajoittavat osmiumkiinnitysaineiden käyttöä.

Alaviitteet

1. ↑ Roskin, 1946 , s. 81.
2. ↑ Roskin, 1946 , s. 88-89.
3. ↑ 1 2 Roskin, 1946 , s. 91.
4. ↑ Roskin, 1946 , s. 93.
5. ↑ Roskin, 1946 , s. 95.

Kirjallisuus

• Roskin G. I. Mikroskooppinen tekniikka. - M . : Valtion kustantamo "Neuvostoliiton tiede", 1946.