Keltainen fluoresoiva proteiini

Yellow Fluorescent Protein on vihreän  fluoresoivan proteiinin ( GFP ) geneettinen mutanttimuoto , joka on eristetty Aequorea victoria meduusoista . Sille on tunnusomaista absorptiomaksimi aallonpituudella 514 nm ja fluoresenssin maksimi aallonpituudella 527 nm. Sitä käytetään laajalti fluoresoivana leimana solu- ja molekyylibiologiassa soluproteiinien ilmentymisen tutkimiseen. Sen lisäksi on kehitetty joukko muita GFP :n mutanttimuotoja , kuten sininen, syaani jne. [1].

FRET-hakemus

YFP :n absorptiospektri on melko vahvasti päällekkäinen CFP :n ( eng.  Cyan Fluorescent Protein ) fluoresenssispektrin kanssa, joten näitä kahta fluoroforia käytetään biosensoreiden luomiseen, jotka perustuvat Försterin energiansiirto - ilmiöön (FRET) . Tällaisia ​​antureita käytetään havaitsemaan tiettyjä elävissä soluissa tapahtuvia tapahtumia. Erityisesti entsyymiaktiivisuus voidaan määrittää tällä tavalla .

Tällaisen anturin molekyyli sisältää yleensä 4 domeenia [2] :

  1. proteiini, joka on anturin kantaja (se voi olla melkein mikä tahansa proteiini);
  2. fluorofori CFP ;
  3. domeeni, joka muuttaa rakennettaan tietyn vaikutuksen seurauksena (esimerkiksi fosforylaatio );
  4. fluorofori YFP .

Kun tällaista anturia säteilytetään laserilla, jonka aallonpituus herättää vain CFP :tä (esim. 440 nm - ei läheskään viritä YFP :tä , mutta virittää voimakkaasti CFP :tä), voidaan havaita molempien fluoroforien fluoresenssi. Asianmukaisen iskun jälkeen domeeniin 3 anturin rakenne muuttuu, minkä seurauksena YFP- fluorofori siirtyy pois CFP :stä ja Försterin siirron tehokkuus laskee (riippuen siitä, kuinka kaukana fluoroforit olivat erotettu toisistaan). Tämän seurauksena CFP :n fluoresenssin intensiteetti kasvaa, kun taas YFP :n intensiteetti vähenee. Siten YFP -fluoresenssin suhdetta CFP -fluoresenssiin voidaan käyttää määrittämään muutos biosensorin konformaatiossa .

Muistiinpanot

  1. Uemura, T.; Kim, H.; Saito, C.; Ebine, K.; Ueda, T.; Schulze-Lefert, P.; Nakano, A. Trans-Golgi-verkkoon lokalisoidut Qa-SNAREt säätelevät useita kuljetusreittejä ja solunulkoisten tautien vastustuskykyä kasveissa  (englanniksi)  // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United of America  : Journal. - 2012. - Vol. 109 , ei. 5 . - P. 1784-1789 . - doi : 10.1073/pnas.1115146109 . — PMID 22307646 .
  2. Pääsy: Aurora B:n keskialueaktivaatio anafaasissa tuottaa solunsisäisen fosforylaatiogradientin: Luonto . Haettu 7. joulukuuta 2010. Arkistoitu alkuperäisestä 31. lokakuuta 2010.

Katso myös

Bibliografia

Linkit