Monohybridiristeytys on sellaisten muotojen risteytymistä, jotka eroavat toisistaan yhdellä tutkittujen vaihtoehtoisten ominaisuuksien parilla, joista yhden geenin alleelit ovat vastuussa.
Monogeeninen periytyminen, jota tutkitaan monohybridiristeytyksessä, on ominaisuuden periytymistä, jonka ilmenemismuodoista on vastuussa yksi geeni, jonka eri muotoja kutsutaan alleeleiksi . Esimerkiksi monohybridiristeyksessä kahden puhtaan kasvilinjan välillä, jotka ovat homotsygoottisia vastaavien ominaisuuksien suhteen – toisessa on keltaisia siemeniä (dominoiva ominaisuus) ja toisessa vihreitä siemeniä (resessiivinen ominaisuus), ensimmäisen sukupolven voisi odottaa olevan vain keltaiset siemenet, koska alleeli keltaiset siemenet hallitsevat vihreää alleelia.
Gregor Mendelin tekemät kokeet voivat toimia esimerkkeinä monohybridiristeyttämisestä : risteytetään hernekasveja , jotka eroavat toisistaan yhdellä vaihtoehtoisten ominaisuuksien parilla: keltainen ja vihreä väri, tasainen ja ryppyinen siementen pinta, kukkien punainen ja valkoinen väri jne.
Ensimmäisen sukupolven monohybridiristeyttämisen tulos on saatujen hybridien tasaisuus (kaikki jälkeläiset ovat heterotsygoottisia). Toisen sukupolven heterotsygoottisten jälkeläisten monohybridiristeyttämisen tulos on 75 %:n todennäköisyys hallitsevalle fenotyypille ja 25 %:n todennäköisyydellä resessiiviselle fenotyypille toisessa hybridisukupolvessa (jakolaki 3:1). Tällainen tulos havaitaan vain täydellisellä dominanssilla (Aa-heterotsygoottien fenotyyppi on sama kuin AA-homotsygoottien fenotyyppi). Genotyypin mukaan toisen sukupolven hybrideissä havaitaan jakautuminen 1:2:1 (noin 50 %:lla yksilöistä on Aa-genotyyppi ja 25 %:lla kummallakin AA- ja aa-genotyyppi). Epätäydellisellä dominanssilla (kun Aa-genotyypin yksilöillä on fenotyyppi välissä homotsygoottien fenotyyppien välillä), fenotyypin jakautuminen hybridien toisessa sukupolvessa osuu samaan aikaan genotyypin jakautumisen kanssa. Joten, kun ylitetään yökauneuden Mirabilis jalapa -kasvin puhtaat linjat punaisilla ja valkoisilla kukilla, kaikilla ensimmäisen sukupolven hybrideillä on vaaleanpunaiset kukat. Toisessa sukupolvessa havaitaan jakautuminen 1 valkoinen: 2 vaaleanpunainen: 1 punainen.
Tyypillisesti monohybridiristitystä käytetään määrittämään, mikä on toinen sukupolvi vanhempaparista, joka on homotsygoottinen hallitsevan ja resessiivisen alleelin suhteen.