Valovalkaisu

Kokeneet kirjoittajat eivät ole vielä tarkistaneet sivun nykyistä versiota, ja se voi poiketa merkittävästi 8. heinäkuuta 2019 tarkistetusta versiosta . vahvistus vaatii 1 muokkauksen .

Valovalkaisu ( valohaalistuminen, valovalkaisu ) on fluoroforin fotokemiallista tuhoamista . Mikroskopiassa valovalkaisu voi vaikeuttaa fluoresoivien molekyylien havaitsemista , koska viimeksi mainitut tuhoutuvat ajan myötä, kun niitä säteilytetään valolla, joka aiheuttaa fluoresenssia.

Valovalkaisua voidaan käyttää ennen vasta -ainekytkettyjen fluoroforien käyttöä autofluoresenssin sammuttamiseksi, mikä vähentää taustasignaalin tasoa.

Valovalkaisulla voidaan tutkia molekyylien liikettä tai diffuusiota esimerkiksi käyttämällä ( eng. FRAP , Fluorescence recovery after photobleaching ) tai ( eng. FLIP , Fluorescence loss in photobleaching ).

Valovalkaisun vaikutuksen vähentämistä voidaan hallita vähentämällä valolle altistuksen voimakkuutta tai kestoa, lisäämällä fluoroforin pitoisuutta, vähentämällä absorboituneen valon taajuutta (ja fotonienergiaa) tai käyttämällä fluoroforeja, jotka kestävät paremmin hajoamista, esim. Alexa tai DyLight Fluor.

Kesto

Tietystä kemiastaan riippuen molekyylit voivat valovalkaisua absorboituaan vain muutaman fotonin, kun taas vahvemmat molekyylit voivat käydä läpi useita absorptio-/emissiojaksoja ennen hajoamista:

Vihreä fluoresoiva proteiini ( eng. GFP ): 10 4 -10 5 ; 0,1-1 s
Tavallinen orgaaninen väriaine : 105 -106 ; 1-10 s
CdSe/ZnS: 108 ; > 1000 minuuttia

Linkit

Johdatus optiseen mikroskopiaan . Photobleaching artikkeli (englanniksi)
Viegas MS, Martins TC, Seco F., do Carmo A. Parannettu ja kustannustehokas menetelmä autofluoresenssin vähentämiseksi suorissa immunofluoresenssitutkimuksissa formaliinilla kiinnitetyissä parafiiniin upotetuissa kudoksissa (englanniksi) // Eur J Histochem : Journal. - 2007. - Voi. 51 , no. 1 . - s. 59-66 . — PMID 17548270 .