Virtaussytometria (virtaussytometria) on menetelmä dispersion väliaineen tutkimiseksi dispergoidun faasin elementtien osittaisessa analyysissa valonsironta- ja fluoresenssisignaaleja käyttäen . Menetelmän nimi liittyy pääsovellukseen, nimittäin yksittäisten biologisten solujen tutkimukseen virrassa.
Menetelmän perustana on 1) hydrofokusoivan järjestelmän käyttö, joka varmistaa solujen kulkemisen virrassa yksitellen; 2) solujen säteilytys lasersäteilyllä; 3) valonsironta- ja fluoresenssisignaalien rekisteröinti kustakin solusta.
Lisäksi analyysissä otetaan huomioon solun muodostavien tai näytteeseen ennen virtaussytometriaa vietyjen kemiallisten yhdisteiden fluoresenssitaso (autofluoresenssi).
Solususpensio, joka on aiemmin leimattu fluoresoivilla monoklonaalisilla vasta-aineilla tai fluoresoivilla väriaineilla, tulee virtauskennon läpi kulkevaan nestevirtaan. Olosuhteet valitaan siten, että solut asettuvat riviin peräkkäin ns. suihkun hydrodynaaminen fokusointi suihkussa. Hydrodynaaminen fokusointi saadaan aikaan suurella ominaisvirtausnopeudella ulkosuihkussa (jet-sheath) verrattuna tiettyyn näytteen virtausnopeuteen. Kaavamaisesti toimintaperiaate näkyy videossa. Kun ominaisvirtausnopeus ulkosuihkussa kasvaa, solut asettuvat riviin peräkkäin. Sillä hetkellä, kun solu ylittää lasersäteen, ilmaisimet tallentavat:
Sironnan voimakkuus riippuu solun morfologiasta (koko, muoto, sisäinen rakenne), solun suuntautumisesta virtauksessa suhteessa tulevan säteilyn suuntaan ja tulevan säteilyn polarisaatiotilasta.
Fluoresenssin intensiteetti muodostuu kahdesta osasta: spesifinen fluoresenssi ja autofluoresenssi. Spesifinen fluoresenssi liittyy fluorokromimolekyylien emissioon, jotka liittyvät spesifisesti tiettyihin solukomponentteihin (reseptorit, solunsisäiset proteiinit, DNA jne.). Autofluoresenssi liittyy solun omien molekyylien (proteiinit, nukleiinihapot jne.) emissio. Spesifisen fluoresenssin intensiteetti riippuu solussa olevien fluorokromimolekyylien lukumäärästä, herättävän säteilyn aallonpituudesta, fluorokromin absorption (ekstinktio) poikkileikkauksesta tällä aallonpituudella, fluorokromin kvanttisaannosta , optisen säteilyn numeerisesta aukosta. fluoresenssin keräysjärjestelmä ja optisen suodatus- ja tunnistusjärjestelmän spektrialue. Autofluoresenssin intensiteetti riippuu vastaavasti solun omien molekyylien optisista ominaisuuksista. Käytännössä solujen valmistelu ennen mittausta suoritetaan siten, että spesifisen fluoresenssin osuus ylittää autofluoresenssin vaikutuksen useilla suuruusluokilla.
Laitteita solujen analysointiin virtaussytometrialla kutsutaan virtaussytometreiksi tai virtaussytometreiksi . Suosituimmat virtaussytometrit Venäjällä ja IVY-maissa ovat Beckman Coulter Life Sciences [1] ja Becton Dickinson Biosciences .
Tandem-värit:
"Kvanttipisteet" QD560, QD590 jne.
| Patologia lääketieteessä _ | |
|---|---|
| patohistologia | Soluvauriot apoptoosi Nekrobioosi karyopyknoosi karyorrhexis karyolyysi Nekroosi hyytymisnekroosi kollikvaationekroosi kuolio sekvestrointi sydänkohtaus Solujen sopeutuminen Atrofia Hypertrofia Hyperplasia Dysplasia Metaplasia levymäinen rauhas- Dystrofia Proteiini rasvainen hiilihydraatti Mineraali |
| Tyypillisiä patologisia prosesseja |
|
| Laboratoriodiagnostiikka ja ruumiinavaus _ |
|