LB-elatusaine ( eng. Lysogeny broth ) on rikas alusta bakteeriviljelmien kasvulle. Lyhenne LB tulkitaan usein väärin Luria-liemi , Lennox-liemi tai Luria-Bertani-keskiviikko . Keskiviikon reseptin kirjoittajan Giuseppe Bertanin mukaan lyhenne LB tarkoittaa englantia. lysogeeninen liemi - lysogeeninen väliaine. [1] LB-alustan koostumus julkaistiin ensimmäisen kerran vuonna 1951 Bertanin lysogeniaa käsittelevässä paperissa. Tässä artikkelissa kuvataan Enterobacteriaceae P1-, P2- ja P3-faagien eristämistä omassa elatusaineessa optimaalisen Shigellan kasvun ja faagiplakin muodostumisen varmistamiseksi. [1] [2]
LB-elatusaineesta on tullut standardi Escherichia coli -viljelmien kasvattamisessa 1950-luvulta lähtien. [3] [4] [5] [6] [7] LB-alustaa käytetään laajasti molekyylimikrobiologiassa plasmidi-DNA:n ja rekombinanttiproteiinien eristämiseen. Elatusaine on edelleen yleisimmin käytetty Escherichia coli -yhdistelmäkantojen kasvattamiseen . [8] LB-ympäristön käyttö fysiologian tutkimukseen on rajallista. [9]
Useita LB-alustan formulaatioita on kuvattu. Niillä on samanlainen koostumus ja ne sisältävät:
Peptidien ja peptonien lähde on tryptoni . Hiivauute sisältää vitamiineja ja hivenaineita . Natriumioneja, jotka ovat välttämättömiä kuljetukselle ja osmoottiselle tasapainolle, lisätään väliaineeseen natriumkloridina . Tryptoni on myös välttämättömien aminohappojen lähde .
Alkuperäisessä vuoden 1951 paperissa Bertani käytti 10 grammaa NaCl:a ja 1 grammaa glukoosia 1 litraa kohden väliainetta; Luria vuoden 1957 "L-liemi" -ympäristössä kopioi kokonaan Bertanin ympäristön. [6] Seuraavat reseptit eivät sisällä glukoosia.
LB-alustan reseptit eroavat lisätyn natriumkloridin määrästä, mikä mahdollistaa olosuhteiden luomisen erilaisten bakteerikantojen kasvatukselle. Vähäsuolaisia elatusaineita, Lennox LB:tä ja Luria LB:tä käytetään viljelmien kasvattamiseen suolaherkkien antibioottien kanssa. [kymmenen]
Yleinen menetelmä 1 litran väliainetta valmistamiseksi:
Ennen autoklavointia jotkut tutkijat säätävät alustan pH:n arvoon 7,5 tai 8 natriumhydroksidiliuoksella . Natriumhydroksidilla ei kuitenkaan ole puskuroivia ominaisuuksia, joten alustan pH muuttuu dramaattisesti bakteerien lisääntyessä. Tietyn pH-arvon ylläpitämiseksi jotkut tutkijat säätävät pH:n vaadittuun 5-10 mM Tris-liuokseen tietyssä pH:ssa (vaikka puskurin käyttö tällä pitoisuudella ei voi taata tietyn pH:n ylläpitoa bakteerikasvun aikana). Useimmissa tapauksissa väliaineen tarkkaa pH:ta ei vaadita.