| piparjuuriperoksidaasi | |
|---|---|
| Piparjuuriperoksidaasi C1 [1] | |
| Merkintä | |
| Symbolit | peroksidaasi C1A; PRXC1A |
| ATE | 1W4W , Lisää rakenteita |
| UniProt | P00433 |
| Muut tiedot | |
| Koodi KF | 1.11.1.7 |
| Tietoja Wikidatasta ? | |
Piparjuuriperoksidaasi ( HRP ) on piparjuuresta eristetty entsyymi , jota käytetään laajalti molekyylibiologian tekniikoissa parantamaan heikon signaalin havaitsemiseen vaadittavalle tasolle. Piparjuuriperoksidaasin molekyylipaino on noin 44173,9 Da, se on glykoproteiini ja siinä on neljä lysiiniaminohappotähdettä kiinnittymään leimattavaan molekyyliin.
Piparjuuriperoksidaasiaktiivisuustuote on väri- tai luminesoiva yhdiste, joka soveltuu havaitsemiseen ja kvantitointiin. HRP:tä käytetään usein osana konjugaatteja tiettyjen molekyylien havaitsemiseen. Esimerkiksi Western blot -menetelmän tapauksessa HRP-konjugaatteja käytetään kohdeproteiineja tai -molekyylejä vastaan suunnattujen vasta-aineiden kanssa; tässä tapauksessa vasta-aine on spesifinen tietylle kohteelle ja HRP muodostaa havaittavan signaalin. [2] . Piparjuuriperoksidaasia käytetään myös tekniikoissa, kuten ELISA :ssa ja immunohistokemiallisessa analyysissä.
Piparjuuriperoksidaasi on ihanteellinen entsyymi moniin sovelluksiin, koska se on suhteellisen pieni, suhteellisen vakaa ja halvempi kuin vaihtoehdot, kuten alkalinen fosfataasi . HRP:llä on suurempi kierrosluku aikayksikköä kohden ja siksi se varmistaa riittävän vahvan signaalin kehittymisen suhteellisen lyhyessä ajassa.
Viime vuosina neuronien leimaustekniikasta piparjuuriperoksidaasilla on tullut yksi tärkeimmistä tutkimusvälineistä. Lyhyen ajan kuluessa enemmän neurotieteilijöitä on käyttänyt piparjuuriperoksidaasia kuin Golgin värjäysmenetelmää vuodesta 1870 lähtien. [3]D. Purves ja JW Lichtman, Principles of Neural Development.
Piparjuuriperoksidaasi vapaassa muodossa tai konjugaattien muodossa muiden molekyylien kanssa edellyttää substraatin läsnäoloa kuvantamista varten. HRP hapettaa substraatin vetyperoksidin läsnä ollessa , jolloin syntyy tuotteita, jotka voidaan havaita spektrofotometrisesti . [neljä]
Kaupallisesti saatavilla olevat piparjuuriperoksidaasisubstraatit 3,3',5,5'- tetrametyylibentsidiini ( TMB ) ja 3,3' - diaminobentsidiini ( DAB ) antavat värillisiä tuotteita hapettuessaan, kun taas SuperSignal- ja ECL- . kemiluminoivat
Piparjuuriperoksidaasi katalysoi luminolin hapettumista 3 -aminoftalaatiksi useiden välituotteiden kautta . Tähän reaktioon liittyy matalan intensiteetin hehku, jonka aallonpituus on 428 nm. Tiettyjen aineiden läsnä ollessa on mahdollista saavuttaa luminesenssin kasvu jopa tuhat kertaa. Luminesenssin vahvistumisen ilmiötä kutsutaan tehostetuksi kemiluminesenssiksi ( ECL ) . Tehokkaimpia tehostajia ovat fenolijohdannaiset, kuten p-jodifenoli. ECL mahdollistaa noin 0,5 pikogramman nukleiinihapon havaitsemisen Southern blotilla .