Parabeenit

Kokeneet kirjoittajat eivät ole vielä tarkistaneet sivun nykyistä versiota, ja se voi poiketa merkittävästi 25. huhtikuuta 2021 tarkistetusta versiosta . tarkastukset vaativat 7 muokkausta .

Parabeenit  ovat parahydroksibentsoehapon estereitä , joita käytetään laajasti säilöntäaineina kosmetiikka-, lääke- ja elintarviketeollisuudessa niiden antiseptisten ja fungisidisten ominaisuuksien vuoksi.

Parabeenien suosio johtuu niiden tehokkuudesta säilöntäaineina, alhaisista kustannuksista, pitkästä käyttöhistoriasta ja vaihtoehtoisten luonnollisten säilöntäaineiden, kuten greipinsiemenuutteen , tehottomuudesta [1] . Parabeenien turvallisuus on kyseenalaistettu, kun niitä on löydetty korkeina pitoisuuksina rintasyövän hoidossa [2] . Syy-yhteys parabeenien käytön ja syövän esiintymisen välillä on kuitenkin edelleen kiistanalainen [3] [4] .

Kemia

Parabeenit ovat para - hydroksibentsoehapon estereitä , jotka antoivat nimen parabeeneille . Yleisimmät parabeenit ovat metyyliparabeeni ( elintarvikelisäainekoodi  E218), etyyliparabeeni (E214), propyyliparabeeni (E216) ja butyyliparabeeni . Vähemmän yleisiä ovat isobutyyliparabeeni , isopropyyliparabeeni , bentsyyliparabeeni , heptyyliparabeeni (E209). Parabeenien natriumsuoloja (esim. E217 ) käytetään, kun on tarpeen lisätä niiden vesiliukoisuutta.

Synteesi

Kaikki kaupallisesti käytetyt parabeenit on valmistettu synteettisesti . Niitä saadaan esteröimällä parahydroksibentsoehappo vastaavilla alkoholeilla . Para -hydroksibentsoehappo valmistetaan käyttämällä modifioitua Kolbe-Schmitt- reaktiota kaliumfenolaatista ja hiilidioksidista .

Esiintyminen luonnossa

Joitakin parabeeneja on löydetty kasveista. Esimerkiksi metyyliparabeenia on löydetty mukula- oksalin juurista [5] .

Toksikologia

Jyrsijöillä tehdyt akuutteja, subkroonisia ja kroonisia vaikutuksia koskevat tutkimukset ovat osoittaneet, että parabeenit ovat käytännössä myrkyttömiä [6] [7] . Parabeenit imeytyvät, metaboloituvat ja erittyvät elimistöstä nopeasti [6] . Tärkeimmät parabeenimetaboliitit: p -hydroksibentsoehappo (pHBA), p -hydroksihippurihappo (M1), p - hydroksibentsoeglukuronidi (M3), p - karboksifenyylisulfaatti (M4) [8] .

Allergiset reaktiot

Ihmisillä, joilla on normaali iho, parabeenit eivät aiheuta ärsytystä ja yliherkkyyttä [9] . Yliherkkyyttä parabeeneille voi esiintyä ihmisillä, joilla on vaurioitunut iho, mutta jopa kroonista ihotulehdusta ja kroonisia jalkahaavoja sairastavilla henkilöillä sitä esiintyy alle 4 prosentissa tapauksista [9] .

Allergia parabeeneille ärsytyksen, kosketusihottuman ja ruusufinnien muodossa on harvinaista [ 10 ] , mutta parabeenittoman kosmetiikkateollisuuden kehittyessä raportoitujen tapausten määrä on vähentynyt merkittävästi [9] . Allergia parabeeneille on kuitenkin ollut jo pitkään tiedossa ja hyvin dokumentoitu, kun taas uudempien säilöntäaineiden käyttö voi johtaa allergian uusiutumiseen näille vähemmän tutkituille yhdisteille [9] .

Rintasyöpä

Useat erikoistutkimukset ovat osoittaneet, että parabeenien käytön ja rintasyövän esiintymisen välillä on epäsuorasti vahvistettu korrelaatio. Syöpäkasvaimissa on havaittu korkeita parabeenin pitoisuuksia [2] [11] ; tarkemmin sanottuna brittiläisessä tutkimuksessa havaittiin, että kasvaimissa havaitaan korkea parabeenin pitoisuus 18:ssa 20:stä rintasyöpätapauksesta [2] . Nämä havainnot sekä parabeenien todistettu kyky jäljitellä estrogeenejä (naishormoneja, joilla tiedetään olevan rooli rintasyövässä [2] ) ovat saaneet jotkut tutkijat päättelemään, että parabeenien käyttö liittyy rintasyöpään [12] [13] ; vaadittiin tutkimuksia syy-yhteyden olemassaolosta tai puuttumisesta [14] . Philippa Darbre, molekyylibiologi Readingin yliopistosta (Yhdistynyt kuningaskunta), sanoo, että kasvaimissa löydettyjen parabeenien esteriryhmän läsnäolo osoittaa, että ne ovat peräisin jostakin, jota on levitetty iholle (kuten kainaloiden deodorantti, voide tai vartalosuihke). ja että hänen löydöksensä selittävät, miksi jopa 60 % kaikista rintakasvaimista löytyy vain viidesosasta rinnasta, ylemmässä uloimmassa neljänneksessä, joka on lähinnä kainaloita [12] .

”Tutkimuksen tulokset eivät viittaa siihen, että parabeenit todella aiheuttaisivat kasvaimia, mutta niiden käyttö voisi varmasti liittyä rintasyöpätapausten yleiseen lisääntymiseen. Ottaen huomioon, että rintasyöpä on yleinen naisten tappaja ja että niin monet tytöt käyttävät kainaloiden deodorantteja, mielestäni meidän pitäisi tehdä täysipainoista lisätutkimusta parabeeneista ja niiden kerääntymisestä eri elimiin.

sanoo Philip Harvey, tutkimuksen julkaisijan Journal of Applied Toxicology -lehden toimittaja [12] . Vuonna 2004 Northwestern Universityn tutkimuksessa todettiin, että varhainen rintasyövän diagnoosi liittyi antiperspiranttien/deodoranttien toistuvaan käyttöön ja kainaloiden parranajoon [15] . "Uskon henkilökohtaisesti, että kainaloiden hygienian ja rintasyövän välillä on vahva korrelaatio", sanoo immunologi Kris McGrath , tutkimuksen kirjoittaja [13] .

Tämä tutkimus tuki yleistä käsitystä, että kainaloiden deodoranteissa ja muissa kosmetiikkatuotteissa olevat parabeenit voisivat siirtyä rintakudokseen ja edistää kasvainten kehittymistä. Suoraa näyttöä parabeenien ja syövän välisestä syy-yhteydestä ei kuitenkaan ole esitetty. Vuonna 2005 tuolloin saatavilla olevista tiedoista tehdyssä tutkimuksessa todettiin, että "parabeenit eivät biologisesti pysty lisäämään minkään estrogeeniin liittyvän sairauden riskiä, ​​mukaan lukien miehen lisääntymisjärjestelmän sairaudet tai rintasyöpä", ja että "pahimmassa tapauksessa päivittäin altistuminen parabeeneille aiheuttaa huomattavasti pienemmän riskin verrattuna altistumiseen luonnollisille hormonitoimintaa häiritseville aineille, kuten fytoestrogeeni daitseiinille , jota löytyy joistakin elintarvikkeista” [3] . American Cancer Society teki myös seuraavat havainnot:

Tähän mennessä tehdyt tutkimukset eivät tue syy-yhteyttä parabeenien ja kasvainten välillä, eivätkä ne myöskään osoita, että parabeenit ovat turvallisia. Parabeenien pitkäaikaisen käytön vaikutusta ihmisten terveyteen ei ole vielä yleisesti tutkittu [17] .

Seuraavassa vuonna 2008 tehdyssä systemaattisessa tutkimuksessa tarkasteltiin yhteensä 59 julkaisua (joista 19 valittiin tiukkaan analyysiin) vastatakseen seuraaviin kysymyksiin:

  1. Onko olemassa kokeellisia tai biologisia tietoja, jotka tukevat mahdollista yhteyttä deodorantin/antiperspirantin käytön ja rintasyövän välillä?
  2. Lisääkö deodoranttien/antiperspiranttien käyttö rintasyövän riskiä?
  3. Voisiko deodorantin/antiperspirantin käytön ja rintasyövän välillä olla syy-yhteys?

Tutkimuksen tekijät väittävät, ettei ole olemassa "tieteellistä näyttöä ehdotettujen hypoteesien tueksi" ja että "ilmeisesti ei ole ehdotuksia uusista tutkimuksista tähän suuntaan". He päättelivät: "Loppujen lopuksi näyttää turvalliselta sanoa, että tämä ei ole kansanterveyskysymys, ja siksi aiheen lisätutkimus vaikuttaa turhalta" (" Au final, il semmble possible d'affirmer que cette question ne constitue pas un problème de santé publique et qu'il apparaît donc inutile de poursuivre les recherches sur ce sujet " [18] ).

Estrogeeninen aktiivisuus

Eläinkokeet ovat osoittaneet, että parabeenilla on heikko estrogeeninen aktiivisuus, ja ne toimivat kuten ksenoestrogeenit [19] . In vivo -tutkimuksissa butyyliparabeenin vaikutus oli noin 100 000 kertaa heikompi kuin estradiolin , ja se havaittiin annoksilla, jotka olivat noin 25 000 kertaa suuremmat kuin elintarvikkeiden säilönnässä yleisesti käytetyt [20] . Tutkimuksessa havaittiin myös, että parabeenien estrogeeniaktiivisuus in vivo on kolme suuruusluokkaa heikompi verrattuna niiden aktiivisuuteen in vitro .

Parabeenien estrogeeninen aktiivisuus lisääntyy alkyyliryhmän pidentyessä. Propyyliparabeenilla uskotaan myös olevan estrogeenista aktiivisuutta [21] , vaikka sen odotetaan olevan alhaisempi kuin butyyliparabeenilla propyyliryhmän vähemmän lipofiilisen luonteen vuoksi. Koska butyyliparabeenin estrogeenisen aktiivisuuden katsotaan olevan mitätön normaaleissa käyttötavoissa, sama johtopäätös voidaan tehdä sen lyhyempiketjuisista vastineista.

Tiedetään, että jotkut estrogeenit edistävät kasvainten kehittymistä, mutta estrogeeninen aktiivisuus ja estrogeeninen mutageeninen aktiivisuus eivät ole sama asia; jälkimmäinen johtuu vapaiden radikaalien toiminnasta, ei estrogeenireseptorien aktiivisuudesta [22] . Tämä tutkimus herätti kuitenkin huolta butyyliparabeenin (ja vähäisemmässä määrin muiden parabeenien) käytön turvallisuudesta kosmetiikassa ja antiperspiranteissa. Paraben Safety Assessment -tutkimuksessa (2005) todettiin, että tuolloin saatavilla olevien tietojen perusteella parabeeneja sisältävät kosmetiikkatuotteet eivät aiheuttaneet terveysriskiä, ​​koska ne sisälsivät vähän parabeeneja ja todennäköisyys, että ne tunkeutuisivat kudoksiin muuttumattomina myöhemmän kertymisen jälkeen on mitätön. [6] .

Kun parabeeneja nautitaan ruoan kanssa, ne metaboloituvat ja menettävät esteriryhmänsä, mikä johtaa niiden vaikutuksen heikkenemiseen estrogeenin jäljittelijöinä [12] .

Yhdistetty altistuminen parabeeneille ja auringonvalolle

Tutkimukset ovat osoittaneet, että iholle levitetty metyyliparabeeni on vuorovaikutuksessa ultraviolettivalon kanssa , mikä edistää ihon ikääntymistä ja DNA-vaurioita [23] [24] .

Asetus

Vuonna 2006 Euroopan kuluttajatuotteita käsittelevä tiedekomissio (ENPP, eng.  SCCP ) totesi, että saatavilla olevat tiedot parabeeneista eivät anna ratkaisevaa vastausta kysymykseen siitä, ovatko propyyli-, butyyli- ja isobutyyliparabeenit turvallisia käytettäessä kosmetiikassa yksittäisille ihmisille. pitoisuudet jopa 0,4 % (EU:ssa sallittu raja [25] ).

American Society for Cancer Researchin, Food and Drug Administrationin (FDA) ja Scandinavian Society for Cosmetic Chemistryn vuonna 2008 laatiman yhteisen raportin mukaan , joka perustuu yli tuhannen riippumattoman tutkimuksen analyysiin, parabeenien käyttö kosmetiikassa. teollisuus ei aiheuta riskiä.

Vuodesta 2014 lähtien Ranska on kuitenkin kieltänyt parabeenien, kuten isopropyylin, isobutyylin, pentyylin ja bentsyyliparabeenin, käytön. Kosmeettisten tuotteiden turvallisuutta käsittelevä komissio katsoi, että parabeenien käytön turvallisuudesta vakiintuneina pitoisuuksina on saatu lukuisia vahvistuksia, mutta lisätutkimusta tarvitaan [26] .

Kiista

Yllä olevat tutkimukset ovat johtaneet keskusteluihin tiedeyhteisössä ja massojen keskuudessa [27] [28] . F. Darbren artikkeli herätti huolenaiheita parabeenien mahdollisesta syöpää aiheuttavasta [29] tai estrogeenisesta aktiivisuudesta, joka johtuu niiden pitkäaikaisesta käytöstä säilöntäaineina.

Kosmetiikkateollisuus uskoo yleisesti, että parabeenit, kuten useimmat muut kosmeettiset ainesosat, ovat turvallisia pitkäaikaiseen käyttöön turvallisuusmääräysten ja viimeaikaisen tieteellisen tutkimuksen kannalta [30] . Yhteisön järjestöt, jotka edistävät tietoisuutta kosmeettisista ainesosista, uskovat, että lisätutkimusta tarvitaan parabeenien turvallisuuden arvioimiseksi [29] . Yhteiskuntaan liittyvä huoli parabeenien käytön mahdollisista vaaroista on saanut kuluttajat ja yritykset etsimään vaihtoehtoja [31] . Luonnollisena säilöntäaineena markkinoitu greipinsiemenuutteen on todettu sisältävän keinotekoisia säilöntäaineita ( bentsetoniumkloridia , metyyliparabeeniä ja triklosaania [1] ); on kuitenkin luonnollinen säilöntäaine, joka koostuu greipinsiemenuutteesta ja glyseriinistä.

Linkit

  1. 1 2 von Woedtke T., Schluter B., Pflegel P., Lindequist U., Julich W.D. Greippisiemenuutteen antimikrobisen tehon näkökohdat ja sen suhde  sisältyviin säilöntäaineisiin //  Pharmazie : päiväkirja. — Greifswald, Saksa: Institute of Pharmacy, Ernst Moritz Arndt University, 1999. — Kesäkuu ( nide 54 , nro 6 ). - s. 452-456 . — PMID 10399191 .
  2. 1 2 3 4 Harvey PW, Everett DJ P-hydroksibentsoehapon (parabeenien) esterien havaitsemisen merkitys ihmisen rintakasvaimissa  //  Journal of Applied Toxicology : päiväkirja. - 2004. - tammikuu ( osa 24 , nro 1 ) . - s. 1-4 . - doi : 10.1002/jat.957 . — PMID 14745840 .
  3. 1 2 Golden R., Gandy J., Vollmer G. Katsaus parabeenien endokriiniseen aktiivisuuteen ja mahdollisiin riskeihin ihmisten terveydelle  //  Critical Reviews in Toxicology : päiväkirja. - 2005. - Voi. 35 , ei. 5 . - s. 435-458 . - doi : 10.1080/10408440490920104 . — PMID 16097138 .
  4. Monica Giulivo et ai. Ihmisen altistuminen hormonitoimintaa häiritseville yhdisteille: Niiden rooli lisääntymisjärjestelmissä, metabolinen oireyhtymä ja rintasyöpä. Katsaus . Haettu 30. heinäkuuta 2017. Arkistoitu alkuperäisestä 25. kesäkuuta 2017.
  5. Bais HP, Vepachedu R., Vivanco JM. Fluoresoivien beeta-karboliinien juurispesifinen herättäminen ja erittyminen Oxalis tuberosan  transformoiduissa juuriviljelmissä // Plant Physiology  : Journal  . - American Society of Plant Biologists , 2003. - Voi. 41 , no. 4 . - s. 345-353 . - doi : 10.1016/S0981-9428(03)00029-9 .
  6. 1 2 3 Soni MG, Carabin IG, Burdock GA P-hydroksibentsoehapon (parabeenien  ) esterien turvallisuusarviointi  // Food and Chemical Toxicology : päiväkirja. - 2005. - Voi. 43 , no. 7 . - s. 985-1015 . - doi : 10.1016/j.fct.2005.01.020 . — PMID 15833376 .
  7. Soni MG, Taylor SL, Greenberg NA, Burdock GA Metyyliparabeenin terveysnäkökohtien arviointi: katsaus julkaistuun kirjallisuuteen   // Food and Chemical Toxicology : päiväkirja. - 2002. - Voi. 40 , ei. 10 . - s. 1335-1373 . - doi : 10.1016/S0278-6915(02)00107-2 . — PMID 12387298 .
  8. Vanhin RL Loppuraportti metyyliparabeenin, etyyliparabeenin, propyyliparabeenin ja butyyliparabeenin turvallisuusarvioinnista   // J Am Coll Toxicol  : Journal . - 1984. - Voi. 3 . - s. 147-209 .
  9. 1 2 3 4 Castelain F., Castelain M. Parabeenit: todellinen vaara vai kauhutarina? (neopr.)  // European Journal of Dermatology . - 2012. - T. 22 , nro 6 . - S. 723-727 . - doi : 10.1684/ejd.2012.1835 . — PMID 23131320 .
  10. Nagel JE, Fuscaldo JT, Fireman P. Paraben allergy  (englanniksi)  // J Am Med Assoc  : Journal. - 1977. - Voi. 237 , nro. 15 . - P. 1594-15955 . doi : 10.1001 / jama.237.15.1594 . — PMID 576658 .
  11. Darbre PD, Aljarrah A., Miller WR, Coldham NG, Sauer MJ, Pope GS Parabeenin pitoisuudet ihmisen rintakasvaimissa   // J Appl Toxicol : päiväkirja. — Voi. 24 , nro. 1 . - s. 5-13 . - doi : 10.1002/jat.958 . — PMID 14745841 .
  12. 1 2 3 4 Vince G. Rintakasvaimissa löydetyt kosmeettiset kemikaalit . New Scientist (12. tammikuuta 2004). Haettu 4. lokakuuta 2017. Arkistoitu alkuperäisestä 30. huhtikuuta 2012.
  13. 12 Lagorio , Christine . Syöpä-antiperspirantti "Myytti": Voisiko parranajo ja antiperspirantti liittyä rintasyöpään?  (5. joulukuuta 2005). Arkistoitu alkuperäisestä 21. helmikuuta 2011. Haettu 2. tammikuuta 2009.
  14. Harvey PW, Darbre P. Hormonitoimintaa häiritsevät aineet ja ihmisten terveys: Voivatko vartalonhoitokosmetiikan estrogeeniset kemikaalit vaikuttaa haitallisesti naisten rintasyövän ilmaantumiseen? Katsaus todisteisiin ja lisätutkimuspyyntö  //  Journal of Applied Toxicology : päiväkirja. - 2004. - Voi. 24 , nro. 3 . - s. 167-176 . - doi : 10.1002/jat.978 . — PMID 15211609 .
  15. McGrath, Chris. Rintasyöpädiagnoosin varhaisempi ikä liittyy antiperspiranttien/deodoranttien ja kainaloiden parranajon yleisempään käyttöön  // European Journal of Cancer  Prevention : päiväkirja. - 2003. - Joulukuu ( osa 12 , nro 6 ). - s. 479-485 . - doi : 10.1097/00008469-200312000-00006 . — PMID 14639125 .
  16. The American Cancer Society arkistoitu 16. elokuuta 2004 Wayback Machinessa Antiperspirants and Breast Cancer Risk
  17. Rintakasvaimissa löydetty antiperspirantti . Web MD. Haettu 28. kesäkuuta 2010. Arkistoitu alkuperäisestä 30. huhtikuuta 2012.
  18. Namer M., Luporsi E., Gligorov J., Lokiec F., Spielmann M. [Deodoranttien/antiperspiranttien käyttö ei muodosta rintasyövän riskitekijää ] (ranskaksi englanniksi abstrakti) // Bulletin du Cancer. - 2008. - syyskuu ( osa 95 , nro 9 ). - S. 871-880 . - doi : 10.1684/bdc.2008.0679 . — PMID 18829420 .
  19. Byford JR, Shaw LE, Drew MG, Pope GS, Sauer MJ, Darbre PD  Parabeenien estrogeeninen aktiivisuus ihmisen MCF7-rintasyöpäsoluissa  // J Steroid Biochem Mol Biol : päiväkirja. - 2002. - tammikuu ( osa 80 , nro 1 ) . - s. 49-60 . - doi : 10.1016/S0960-0760(01)00174-1 . — PMID 11867263 .
  20. Edwin J. Routledge, et ai. Jotkut alkyylihydroksibentsoaattisäilöntäaineet (parabeenit) ovat estrogeenisiä  //  Toksikologia ja sovellettu farmakologia : päiväkirja. - 1998. - Voi. 153 , no. 1 . - s. 12-19 . - doi : 10.1006/taap.1998.8544 . — PMID 9875295 .
  21. Cashman AL, Warshaw EM Parabens: katsaus epidemiologiaan, rakenteeseen, allergeenisuuteen ja hormonaalisiin ominaisuuksiin  //  Dermatitis : Journal. - 2005. - Kesäkuu ( osa 16 , nro 2 ) -P . tietokilpailu 55-6 . — PMID 16036114 .
  22. Fernandez SV, Russo IH, Russo J. Estradioli ja sen metaboliitit 4-hydroksiestradioli ja 2-hydroksiestradioli aiheuttavat mutaatioita ihmisen rintojen epiteelisoluissa  //  Int J Cancer : päiväkirja. - 2006. - 15. huhtikuuta ( nide 118 , nro 8 ). - P. 1862-1868 . - doi : 10.1002/ijc.21590 . — PMID 16287077 .
  23. Osamu Handa, Satoko Adachi, Tomohisa Takagi et al. Metyyliparabeeni voimistaa ihon keratinosyyttien UV-indusoitua vauriota  (englanniksi)  // Toxicology : Journal. - 2006. - 3. lokakuuta ( nide 227 , nro 1-2 ). - s. 62-72 . - doi : 10.1016/j.tox.2006.07.018 . — PMID 16938376 .
  24. Yoshinori Okamoto, Tomohiro Hayashi, Shinpei Matsunami, Koji Ueda, Nakao Kojima. Yhdistetty metyyliparabeenin aktivointi valosäteilyllä ja esteraasin aineenvaihdunta kohti oksidatiivista DNA-vauriota  //  Chemical Research in Toxicology : päiväkirja. - 2008. - 26. heinäkuuta ( nide 21 , nro 8 ). - s. 1594-1599 . doi : 10.1021 / tx800066u .
  25. SCCP: Lausunto parabeeneista Arkistoitu 19. toukokuuta 2011 Wayback Machinessa . Colipa nro P82 10.10.2006.
  26. Yana Zubtsova, Tiina Orasmäe-Meder. Kauneusmyyttejä: Totuus Botoxista, kantasoluista, luomukosmetiikasta ja muusta . — M .: Alpina Publisher , 2015. — 296 s. - ISBN 978-5-9614-4887-0 .
  27. Jones J. Voivatko huhut aiheuttaa syöpää? (englanti)  // National Cancer Instituten lehti : päiväkirja. - 2000. - 20. syyskuuta ( nide 92 , nro 18 ). - s. 1469-1471 . doi : 10.1093 / jnci/92.18.1469 .
  28. Antiperspirantit EIVÄT aiheuta rintasyöpää . Breastcancer.org (15. elokuuta 2008). Haettu 15. huhtikuuta 2010. Arkistoitu alkuperäisestä 12. maaliskuuta 2009.
  29. 1 2 Rita Arditti. Kosmetiikka, parabeenit ja rintasyöpä (linkki ei saatavilla) . Organic Consumers Association (9. kesäkuuta 2004). Haettu 28. kesäkuuta 2010. Arkistoitu alkuperäisestä 30. huhtikuuta 2012. 
  30. Totuus antiperspiranteista ja rintasyövästä (linkki ei saatavilla) . Unilever . Haettu 2. marraskuuta 2018. Arkistoitu alkuperäisestä 30. huhtikuuta 2012. 
  31. Lebovits SC. Kosmetiikkayritykset ottavat huomioon orgaanisten tuotteiden vaatimukset . Boston Globe (26. toukokuuta 2008). Käyttöpäivä: 28. kesäkuuta 2010. Arkistoitu alkuperäisestä 3. maaliskuuta 2016.