Ti-plasmidi

Kokeneet kirjoittajat eivät ole vielä tarkistaneet sivun nykyistä versiota, ja se voi poiketa merkittävästi 4.11.2021 tarkistetusta versiosta . vahvistus vaatii 1 muokkauksen .

Ti-plasmidi ( englanniksi  Ti-plasmid englanniksi tuumori  inducing  - inducing formation of tumors) on maaperän Agrobacterium tumefaciens -bakteerin plasmidi , jonka kanssa se aiheuttaa kasvaimia kasveissa . Ti-plasmidin alue, joka tunnetaan nimellä T-DNA ( englanniksi transfer DNA ), voidaan integroida kasvin genomiin ja sisältää geenejä kasvihormonien ja opiinien biosynteesiin , jotka laukaisevat kasvaimen muodostumisen [1 ] .  

Rakennus

Ti-plasmidi on pyöreä kaksijuosteinen DNA - molekyyli , joka koostuu 214 233  emäsparista (bp) ja sisältää 199 geeniä. Plasmidi sisältää 12-22 tuhannen emäsparin alueen, joka tunnetaan nimellä T-DNA ja joka voidaan integroida kasvin genomiin. Kuusi T-DNA:ssa lokalisoituvaa geeniä - iaaM1, iaaH2, ipt, tml6, 6a, 6b - vastaavat opiiinien ja joidenkin fytohormonien biosynteesistä ja iaaM-, iaaH2- ja ipt-geenit ovat onkogeenejä . Näiden geenien ilmentyminen laukaisee kasvaimen muodostumisen - kyhmyn tartunnan saaneen kasvin juuressa [1] .

T-DNA:n lisäksi Ti-plasmidi sisältää vir-alueen, jota edustaa virABCDEFG- operoni [2] . Vir -geenit ovat vastuussa T-DNA:n leikkaamisesta ja siirtämisestä kasvisoluihin . VirA - geeni koodaa reseptoria ( histidiinikinaasi ), joka reagoi vaurioituneista kasvisoluista vapautuville fenoliyhdisteille , kuten asetosyringonille , syringaldehydille [ ja aposyniinille [3] . VirB -geeni koodaa pilin kaltaisia ​​proteiineja , virC -geenituote sitoutuu siirrettävään sekvenssiin ja virD1- ja virD2- geenien koodaamat proteiinit ovat endonukleaaseja , jotka tunnistavat suoria toistoja T-DNA:n päissä ja tekevät leikkauksia näille alueille. jossa on mukana virD4-apuproteiini [4] . VirE -geenituote välittää T-DNA:n varsinaista siirtymistä kasvisoluun, ja virG -geenin koodaama proteiini laukaisee vir-geenien ilmentymisen sen jälkeen, kun se on fosforyloitu aktivoidulla virA-proteiinilla [5] [6] .

Ti-plasmidi sisältää myös opininkäsittelygeenejä ja tra-alueen, joka mahdollistaa plasmidin konjugatiivisen siirron kahden bakteerin välillä [7] .

Infektio

T-DNA:n vieminen kasvin genomiin etenee neljässä vaiheessa:

T-DNA voi päästä kasviin vain vauriokohdassa edellä kuvattujen virA-reseptorin erityispiirteiden vuoksi. Lisäksi tunkeutumiseen vaikuttavat ympäristön happamuus ja lämpötila . T-DNA:n tunkeutumista välittävät erityiset T-paalut, jotka sijaitsevat ohuiden taipuisten fibrillien nipun muodossa bakteerisolun yhdessä napoissa. T-DNA:n leikkaaminen ja integroituminen kasvin genomiin tapahtuu vir-geenien tuotteiden välityksellä. T-DNA:n siirtyminen bakteerisolun sytoplasmaan kestää 30 minuuttia, eikä bakteeri itse pääse kasvisolun sisään, vaan sijaitsee solujen välisessä tilassa ja käyttää infektoituneita T-DNA-soluja mielipiteiden toimittajana, jotka toimivat hiilen ja typen lähteenä bakteerille. Virulenssigeenin ilmentymisen induktioon liittyy myös spesifisiä solunsisäisiä kasvien metaboliitteja , jotka muodostuvat haavavaurioiden aikana [8] .

Sovellukset geenitekniikassa

Agrobacterium tumefaciensia käytetään aktiivisesti geenitekniikassa siirtogeenisten kasvien luomiseen sen kyvyn vuoksi transformoida kasvisoluja, ja tarvittava geeni toimitetaan kasvin genomiin osana T-DNA:ta [9] .

Muistiinpanot

  1. 1 2 Gigani, 2017 , s. 91-92.
  2. Stachel SE , Nester EW Agrobacterium tumefaciensin A6 Ti -plasmidin vir-alueen geneettinen ja transkriptionaalinen organisaatio.  (englanniksi)  // The EMBO Journal. - 1986. - Heinäkuu ( osa 5 , nro 7 ) . - s. 1445-1454 . — PMID 3017694 .
  3. Lohrke SM , Yang H. , Jin S. Asetosyringonivälitteisen Agrobacterium tumefaciensin virulenssigeenin ilmentymisen uudelleen muodostaminen heterologisessa isännässä Escherichia coli  //  Journal of Bacteriology. - 2001. - 15. kesäkuuta ( nide 183 , nro 12 ). - P. 3704-3711 . — ISSN 0021-9193 . - doi : 10.1128/JB.183.12.3704-3711.2001 .
  4. Hamilton CM , Lee H. , Li PL , Cook DM , Piper KR , von Bodman SB , Lanka E. , Ream W. , Farrand SK TraG RP4:stä ja TraG ja VirD4 Ti-plasmideista antavat relaksosomispesifisyyttä konjugaaliselle siirtojärjestelmälle pTiC58.  (Englanti)  // Journal Of Bacteriology. - 2000. - maaliskuu ( osa 182 , nro 6 ) . - s. 1541-1548 . — PMID 10692358 .
  5. Schrammeijer B. , Beijersbergen A. , Idler KB , Melchers LS , Thompson DV , Hooykaas PJ . Agrobacterium tumefaciens oktopiini Ti-plasmidin pTi15955 vir-alueen sekvenssianalyysi.  (englanniksi)  // Journal Of Experimental Botany. - 2000. - Kesäkuu ( nide 51 , nro 347 ). - s. 1167-1169 . — PMID 10948245 .
  6. Alexander N. Glazer, Hiroshi Nikaidō. Mikrobibiotekniikka: soveltavan mikrobiologian perusteet  (englanti) . - Cambridge University Press , 2007. - ISBN 0-521-84210-7 .
  7. 1 2 Gigani, 2017 , s. 92.
  8. Gigani, 2017 , s. 92-93.
  9. Dale & Park, 2004 , s. 241.

Kirjallisuus